[发明专利]葡聚糖单克隆抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学和制糖技术。

背景技术

葡聚糖是一线形的葡萄糖分子的聚合物，分子式为(C₆H₁₀O₅)_n，分子量不定，一般在几万至几百万之间，呈胶粘状，粘度随分子量和浓度的增加而增加。葡聚糖通常可溶于水、蔗糖溶液、氯化钠溶液和乙醇溶液中，溶解性随分子量和浓度的增加而下降。在甘蔗和蔗汁中，葡聚糖是由微生物产生的酶引起葡萄糖聚合而成的。从蔗汁到精制产品，所有制糖工艺过程自始至终存在着葡聚糖所引起的麻烦。葡聚糖使原糖旋光度提高，造成“虚假旋光度”；葡聚糖对原糖精炼极为有害，它明显增大糖液的粘度，降低糖液的过滤性，使蔗糖结晶时生成异常形态的晶体，增加精炼成本。白糖中含有葡聚糖会影响其作为食品原料的加工性状，如造成饮料浑浊、影响巧克力等糖果的成形包装等。大麦中含有2-10％的β-葡聚糖，在用大麦酿造啤酒时，由于麦芽汁中含有这种多糖导致粘度很高，无法过滤；在成品中如果含β-葡聚糖，将会在啤酒冰冻后形成雪花状浑浊物。在生物医药领域，葡聚糖作为血溶扩张剂、抗休克输液等产品，用量极大。研究还证明了β-葡聚糖是一种强有效的免疫系统增强剂，最近发现又证实β-葡聚糖是一种很有潜力的癌症免疫疗法补充剂，引起了全世界的广泛关注。

目前，葡聚糖的检测方法主要有四种(1)Haze法，(2)Amstar契约法，(3)罗伯特--铜法和(4)ICUMSA(国际糖品分析方法委员会)。这四种都是化学分析方法，这些方法都有准确度不高、繁琐复杂、耗时太多等缺点。葡聚糖的快速定量检测目前还是一个难题，免疫学检测方法是一个方向。免疫分析法的基础原理：根据抗葡聚糖单克隆抗体与抗原葡聚糖发生反应生成络合物$(\mathrm{Ab}+\mathrm{Ag}\stackrel{\←}{\→}\mathrm{AbAg}\↓+\mathrm{Ag}\stackrel{\←}{\→}{\mathrm{Ag}}_2\mathrm{Ab}),$从溶液中析出，用浊度计测定析出液的浊度即可测定葡聚糖的含量，在一定含量范围内，所形成的析出液的浊度与其所含的葡聚糖的含量成正比。同化学分析方法相比，免疫分析法不要求从样本中预分离葡聚糖，同时具有操作简单，灵敏度高，不需要特殊仪器设备等优点，是特别适合测定糖品中葡聚糖含量的分析方法。

但由于葡聚糖的低免疫原性，制备抗体非常困难，目前仅有美国Midland公司研制出沉淀法试剂盒，但还处在推广起步阶段，而且价格极为昂贵。开发出具有我国自主知识产权的定量检测葡聚糖的夹心ELISA免疫学试剂盒，为我国制糖、啤酒、医药等行业广泛需求的葡聚糖定量检测提供自主研制的技术方法。这对于控制食糖进口，保护我国制糖工业具有特别重要的意义，并将广泛应用于制糖工业、啤酒工业、医药卫生检验领域，产生巨大的经济效益和社会效益。

发明内容

本发明的目的是为利用免疫学的原理快速测定糖品中葡聚糖含量而提出一种葡聚糖单克隆抗体的制备方法，其可提高葡聚糖免疫原性，解决了葡聚糖免疫原性低下的关键技术问题。

本发明的技术方案如下：

一种葡聚糖单克隆抗体的制备方法，其包括如下步骤：

A.抗原选择及其偶联