[发明专利]以TaqMan探针定量多聚酶链反应技术检测基因单点突变的方法

摘要

本发明提供了一种使用TaqMan探针的实时荧光定量多聚酶链反应(FQ－PCR)技术。该方法针对一个待测DNA点突变位点，对一个待测样品，分别用特异引物和非特异引物进行FQ－PCR检测，通过两次反应Ct值大小的比较及两者差值△Ct的大小，判断该突变位点是野生型纯合子、突变型纯合子和杂合子三者之一。本发明方法的特点在于，使用特殊的PCR体系，独特的PCR反应过程，特征性的检测有效性标准，以及明确的结果判断方式，提高了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测单点突变的准确性和稳定性，适合临床实验室使用。

主权项

1. 一种使用引物特异性荧光定量聚合酶链式反应(PS-FQ-PCR)检测DNA单点突变的方法，该方法包括以下步骤：(1)提供待检靶核酸样品；(2)利用PS-FQ-PCR扩增体系扩增并检测靶DNA片段；(3)以PS-FQ-PCR方法的标准确定检测的有效性；(4)根据所测得的ΔCt值判断野生型、突变型和杂合子。特征在于：(a)针对一个待检测的突变位点，每一个样品，确定突变与否需同时进行两次FQ-PCR；(b)FQ-PCR扩增过程分为两阶段进行；(c)使用附加质控品和被检测样本自身质控两个标准判定检测的有效性；以及(d)根据每个样品两次FQ-PCR测得的ΔCt值判断检测结果。