[发明专利]一种块菌多糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种块菌多糖的制备方法，其步骤首先是将中国块菌菌种接入新鲜的斜面菌种培养基中进行斜面菌种培养；其次是将斜面菌种转接入装有一级液体种子培养基的摇瓶中进行一级液体种子培养；第三是将一级液体种子转接摇瓶中进行二级液体种子的扩大培养；第四是将二级液体种子转接摇瓶进行液体深层发酵；第五是块菌胞外多糖的测定。本发明过程结束时发酵液中的胞外多糖产量可达2.30克/升，制备的块菌多糖具有抑制肿瘤的活性。本发明操作简单，成本低，有利于进一步工业化放大及推广应用。

主权项

1、一种块菌多糖的制备方法，它包括下列步骤：A、斜面菌种培养：斜面菌种培养基克/升为：麦芽糖30-150、硫酸镁0.1-10、磷酸二氢钾0.1-10、琼脂10-30、马铃薯提取液1.0升、pH值为5-8，灭菌条件为：121℃、20分钟，将中国块菌接入新鲜配置的斜面培养基中，置于生化培养箱内培养，培养温度15-40℃，培养时间2-20天；B、一级液体种子培养：将步骤A中培养的斜面菌种转接入装有一级液体种子培养基的摇瓶中进行一级液体种子培养，一级液体种子培养基克/升为：麦芽糖30-150、蛋白胨5-50、硫酸镁0.1-10、磷酸二氢钾0.1-10、pH值与A步相同；培养温度与A步相同、摇床转速50-300rpm、培养时间与A步相同；该培养液即为含有菌种的一级液体种子；C、二级液体种子培养：将步骤B中培养的一级液体种子转接入摇瓶中进行二级液体种子培养，一级液体种子培养基的配方与二级液体种子培养基的配方相同；培养条件为：接种量按体积比为10％、温度与A步相同、摇床转速与B步相同、培养时间2-10天；该培养液即为含有菌种的二级液体种子；D、液体深层发酵：将步骤C中培养的二级液体种子转接摇瓶进行液体深层发酵，发酵培养基配方与B步相同，pH值为5-9，发酵条件：接种量与C步相同、温度与A步相同、摇床转速与B步相同、发酵时间与B步相同；E、块菌胞外多糖的测定：将步骤D中所获得的含有菌丝体的发酵液离心/5000rpm、30分钟，取其上清液用于块菌胞外多糖的测定，采用乙醇沉淀法测定液体深层发酵所获得的块菌胞外多糖，发酵上清液加入四倍体积的无水乙醇，混匀后静置过夜，13000rpm离心4-6分钟后取沉淀，用等量的80％乙醇清洗后在13000rpm下离心4-6分钟得到胞外多糖。