[发明专利]利用核特异荧光染色和子房整体透明技术观察水稻胚囊的方法

摘要

本发明公开了一种利用核特异荧光染色和子房整体透明技术观察水稻胚囊的方法，其方法是用核荧光染色和子房整体透明技术对水稻各个发育时期的胚囊和受精后各个时期的胚胎发育过程进行观察；本发明是在染色前，先用一定浓度的氢氧化钠溶液对水稻子房进行软化处理，然后利用细胞核荧光染料DAPI与细胞核的特异结合来观察胚囊内各细胞及细胞核的结构，在激光扫描共聚焦显微镜下胚囊内各细胞的细胞核以及核仁发出明亮荧光，细胞轮廓比较清晰，层次感强，能清晰观察到细胞的内部构造。不论是对开花前较小的胚囊材料还是开花后较大的胚囊材料都取得了较好的观察效果。

主权项

1、一种利用核特异荧光染色和子房整体透明技术观察水稻胚囊的方法，其特征在于：其方法是用核荧光染色和子房整体透明技术对水稻各个发育时期的胚囊和受精后各个时期的胚胎发育过程进行观察；方法如下，取水稻的颖花用固定液固定，观察前将固定好的颖花用50％-75％的酒精冲洗一下，然后在解剖镜下分离出子房，保存于70％-75％酒精中备用；染色前，各个时期的水稻子房经各级浓度梯度下降的乙醇溶液直至蒸馏水处理，每次20min-30min；然后用NaOH溶液或HCl溶液处理1-2h，蒸馏水冲洗后，再用0.5-1μg/ml的DAPI溶液或Hoechst溶液染色10-24h；接着用乙醇溶液梯度脱水，每级20min-30min；随后将子房放入无水乙醇中脱水至少两次，每次的脱水时间至少1h，接着，再转入无水乙醇中脱水12h以上；然后将已经脱水的子房材料在体积比为1∶1的无水乙醇和水杨酸甲酯组成的混合液中过渡至少1h，再用水杨酸甲酯透明处理至少3次；在前两次透明时，每次至少2h，最后一次透明的时间为15h以上；上述子房材料经过水杨酸甲酯透明处理后可以在水杨酸甲酯中保存备用；观察前，将处理好的子房夹出，置于凹玻片上封片或小培养皿上；将制备好的凹玻片置于荧光显微镜直接观察；或者，将制备好的凹玻片或小培养皿置于激光共聚焦扫描显微镜上，用激光激发，扫描获得成熟胚囊和胚胎发育过程的各个时期的清晰图片。