[发明专利]小麦条锈病菌分子检测方法

摘要

本发明公开了一种小麦条锈病菌分子检测方法，主要采用小麦条锈菌的特异探针(上游引物：5’－TCTGTAAGATGTTAGATGC和下游引物5’－ATGCTGGCAGTGTGGTTG)，经PCR扩增(扩增参数94℃预变性3min；然后94℃变性50sec，54℃退火90sec 72℃延伸2min，共35个循环；72℃延伸10min)、琼脂糖凝胶电泳，通过扩增产物(片段长度约400bp)检测田间小麦的带菌情况。用于在田间早期监测小麦条锈菌的越冬及越春情况，了解病菌的扩展动态，可为小麦条锈病的防治决策提供可靠的技术保障和理论依据。

主权项

1.小麦条锈病菌分子检测方法，其特征在于，包括下列步骤：1)小麦条锈菌检测的特殊引物设计根据小麦条锈菌DNA序列的特性，设计了对条锈菌具特异扩增作用的一对引物：5’-GTCTGTAAGATGTTAGATGC和5’-ATGCTGGCAGTGTGGTTG2)小麦条锈菌检测体系的建立①提取小麦叶片基因组DNA；②PCR扩增，25μL反应体系分别在PCR薄壁管中依次放入：10×Buffer 2.5μL、25mmol/LMgCL2 2.0μL、2.5mmol/LdNTP 1.5μL、上游引物及下游引物各20～40ng、小麦叶片基因组DNA 10～40ng、Taq DNA聚合酶1.0U，最后用无菌去离子水补齐至25μL；离心10sec，将PCR薄壁管放入PCR仪中扩增；扩增条件为：第一循环94℃预变性3min；然后94℃变性50sec，54℃退火90sec 72℃延伸2min，共35个循环；最后一循环，72℃延伸10min补齐末端，扩增完成；③PCR产物在1.5％琼脂糖凝胶上用1×TAE缓冲液中电泳分析，电压为4-5V/cm，电泳结束后用凝胶成像系统分析；④400bp处出现特异条带，说明小麦叶片带菌。