[发明专利]猪钙蛋白酶抑制蛋白基因单体型的分离鉴定方法

摘要

本发明涉及一种猪钙蛋白酶抑制蛋白基因单体型的分离鉴定方法，属于家畜分子生物学技术领域。其步骤包括，提取猪的基因组DNA，钙蛋白酶抑制蛋白基因的PCR扩增，扩增产物的多态性检测，单体型的构建及其与猪肉肉质性状的相关性分析。本发明的特征是分离鉴定出两个新的猪钙蛋白酶抑制蛋白基因的单体型H2121和H1211。本发明利用钙蛋白酶抑制蛋白基因的单体型与猪肉肉质性状显著相关的特性，为猪的标记辅助选种和选配提供了新的分子标记方法。

主权项

1、一种猪钙蛋白酶抑制蛋白基因单体型的分离鉴定方法，其特征在于包括如下步骤：1)采集猪耳组织，利用常规的苯酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA；2)针对钙蛋白酶抑制蛋白基因的单核苷酸多态性位点200A/G、1187C/T，设计钙蛋白酶抑制蛋白基因特异性引物，进行PCR反应，得到扩增产物1；其中，核苷酸编号基于GenBank索引号：AY594692，所述的基因特异性引物具有5`-AAAGCCTACCCACGCACT-3`和5-GCAGATACACCAGTAACAGAAA-3`的序列，所述的扩增产物1长度为100～3000bp，且含有AY594692的200位和1187位；3)针对钙蛋白酶抑制蛋白基因的单核苷酸多态性位点998A/G、1189C/T，设计钙蛋白酶抑制蛋白基因特异性引物，进行PCR反应，得到扩增产物2；其中，核苷酸编号基于GenBank索引号：AY522920，所述的基因特异性引物具有5`-AGTGATGACAAAAAACTTGAC-3`和5`-CTCATCCTTATCCAAGAGATTC-3`的序列，所述的扩增产物2长度为100～3000bp，且含有AY522920的998位和1189位；4)检测扩增产物1的200位和1187位和扩增产物2的998位和1189位的多态性；5)构建单体型，针对扩增产物的多态性用统计分析的方法共分离鉴定出4种单体型H1211，H2121，H2122，H2221；6)通过偏回归分析方法确定与肉质量性状相关的单体型，其中，单体型H2121与肌肉嫩度显著正相关，单体型H1211与肌内脂肪含量显著正相关，携带有上述单体型H2121的个体和单体型H1211个体的猪肉肉质性状显著优于含有其它单体型的个体；其中所述的单体型H2121在GenBank索引号AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引号AY522920的998A/G、1189C/T位点的单核苷酸分别为G、C、G、C；所述的单体型H1211即在GenBank索引号AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引号AY522920的998A/G、1189C/T位点的单核苷酸分别为A、T、A、C。