[发明专利]新型高碱性蛋白酶及其应用

摘要

本发明提供了一种新型高碱性蛋白酶及其应用，该新型碱性蛋白酶具有高碱性活性、表面活性剂耐性、非钙依赖性的耐热性等作为特征的性质，在高碱性洗涤剂中发挥出优异的性能；本发明还提供了编码该新型碱性蛋白酶的氨基酸序列的基因。本发明所提供的碱性蛋白酶具有如下性质：该碱性蛋白酶的作用pH范围为5～13、最适pH在12.6附近、最适温度为70℃、在pH10的条件下加热至65℃时确认不到活性的降低、且最适温度和热稳定性不受Ca²⁺离子的影响。例如，具体地说，本发明所提供的碱性蛋白酶具有序列编号3所示的构成成熟酶的氨基酸序列，或具有其中的部分氨基酸出现缺失、取代、反转、增加或插入的氨基酸序列，或是源自德兰士瓦嗜碱菌的酶。该碱性蛋白酶切断酸型胰岛素B链的29处肽键中的26处。

主权项

1.一种新型碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶具有如下理化性质：(1)作用：作用于酸化型胰岛素B链，在该酸化型胰岛素B链的29处肽键中，切断至少为20处的肽键，切断最多为26处的肽键；(2)基质特异性：分解作为天然蛋白质的酪蛋白、弹性蛋白、角蛋白和血红蛋白；分解作为合成基质的N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-p-硝基酰苯胺、N-戊二酰-Ala-Ala-Pro-Leu-p-硝基酰苯胺、N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Met-p-硝基酰苯胺、N-甲氧基琥珀酰-Ala-Ile-Pro-Met-p-硝基酰苯胺、和N-琥珀酰-Ala-Ala-Val-Ala-p-硝基酰苯胺，生成p-硝基苯胺；(3)作用pH和最适pH：作用pH范围为5～13，于50℃处理10分钟时的稳定pH范围为5～11，最适pH为12.6附近；(4)最适温度和热稳定性：最适温度为70℃，在pH 10的条件下加热10分钟至温度为65℃不会出现活性的降低，是稳定的；最适温度和热稳定性也不会由于Ca2+离子的存在而变化；(5)表面活性剂的影响：活性不受直链烷基苯磺酸钠、聚氧乙烯烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、α-烯烃磺酸钠、链烷磺酸钠、α-磺基脂肪酸酯和聚氧乙烯烷基醇的抑制；(6)分子量：基于十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的分子量为31000～32000。