[发明专利]一种酸性海藻糖酶及其制备方法

摘要

本发明公开了一种虫生真菌金龟子绿僵菌菌株CQMa102酸性海藻糖酶及其制备方法。它采用活化金龟子绿僵菌菌株CQMa102孢子，并在诱导培养基中诱导培养能产生所述酶的微生物以形成所述的酶，并加以纯化制得。制得的蛋白酶是糖蛋白，等电点4.7，分子量170kDa；Trehazolin是其特异性抑制剂，其IC₅₀为1.3×10^－8M。该蛋白在金龟子绿僵菌侵染昆虫过程中对昆虫血淋巴中海藻糖的竞争性利用方面有着重要的作用；同时纯化出的海藻糖酶可以用于工业及其它一些领域海藻糖含量的定性及定量检测。

主权项

1、一种酸性海藻糖酶，它能特异地降解海藻糖为葡萄糖，并具有如下的物理化学特性：(1)作用：特异性降解海藻糖为葡萄糖；(2)分子量：在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳上约为170kDa；(3)等电点：在等电聚焦凝胶电泳等电点电泳上约为4.7；(4)最适温度和最佳pH：海藻糖酶为该酶蛋白的专一性底物，其最适反应温度为30±0.2℃，最佳pH为5.5±0.2；(5)热稳定性：此酶蛋白在40℃温育240min对酶活性没有影响，当孵育温度为50℃时，随着孵育时间延长酶活性线性下降，当温度超过60℃时，酶活性迅速丧失；(6)抑制剂：Trehazolin是此酶蛋白的专一性抑制剂，其IC50为1.3×10-8M；(7)酶动力学特性：此酶蛋白的米氏常数Km为2.3mM，最大酶促反应速度Vmax为0.412mmol min-1 mg-1；其中所述酶是从保藏号为CGMCC No.0877的金龟子绿僵菌CQM a102菌株中提取的。