[发明专利]一种抗关节炎药物细胞靶标筛选系统及筛药的方法

摘要

本发明建立了一种抗关节炎药物的细胞靶标筛选系统及筛药的方法。本发明建立的细胞靶标筛药系统是运用分子克隆技术，分别将mPGES－1 promoter、COX－1 promoter和COX－2promoter部分基因克隆进人细胞株，获得在基因水平上表达的筛药细胞靶标M1、M2和M3，进而共同组成细胞靶标筛药系统。通过测定被筛选化合物抑制M1、M2和M3细胞luciferase表达的程度来筛选抗关节炎药物。

主权项

1.一种抗关节炎药物的细胞靶标筛选系统由如下步骤组成：a)将mPGES-1promoter、COX-1promoter和COX-2promoter的部分基因克隆进pGL3BN载体Luciferase基因上游的克隆位点Xho I/Hind III、Nhe I/Xho I、Xho I/BglII之间重组载体pGL3BN/mPGES-1promoter、pGL3BN/COX-1promoter、pGL3BN/COX-2promoter；b)将构建好的重组质粒pGL3BN/mPGES-1promoter、pGL3BN/COX-1promoter、pGL3BN/COX-2promoter利用脂质体转染法分别转染人A549细胞株；c)利用有限稀释法筛选得到基因水平上稳定表达的筛药细胞靶标M1、M2和M3；d)mPGES-1promoter的表达启动其下游Luciferase的表达。以Luciferase表达水平反映mPGES-1promoter表达程度。同理适用COX-1promoter及COX-2promoter组成共同的靶标筛选系统。