[发明专利]幼鱼或鱼受精卵的DNA鉴定性别的方法

摘要

本发明提供一种青鳉鱼受精卵或幼鱼的DNA鉴定性别的方法，属于鱼类胚胎和早期发育研究领域。该方法包括单个鱼卵或幼鱼的RNA和DNA同步提取技术；用Trizol试剂提取RNA后，剩余有机相中加入DNA提取缓冲液，混匀，50℃－75℃温浴后，低温离心10－15分钟，呈现上下两层，取上层水相加入核酸共沉剂，加入无水乙醇，离心，去除上清，酒精清洗，NaOH溶液溶解，调pH至8.0－8.4，得到单个鱼卵或幼鱼的DNA溶液；将提取的溶液作为模板DNA，加入性别特异PCR引物，进行PCR反应，PCR反应完成后，琼脂糖凝胶电泳检测，如出现目的条带为XY型雄鱼，未出现该条带为XX型雌鱼。本发明鉴定准确性高、效果显著。

主权项

1、一种幼鱼或鱼受精卵的DNA鉴定性别的方法，步骤包括：(1)将单个鱼卵或幼鱼在Trizol试剂中匀浆；(2)在匀浆液中加入氯仿，混匀，低温高速离心，分离RNA和DNA；(3)用Trizol试剂提取RNA后，剩余有机相中加入DNA提取缓冲液，混匀，50℃-75℃温浴后，低温离心10-15分钟，呈现上下两层：上层水相，下层有机相；(4)取上层水相加入核酸共沉剂，加入无水乙醇，离心，去除上清，酒精清洗，NaOH溶液溶解，调pH至8.0-8.4，即得到幼鱼或单个鱼卵的DNA溶液；(5)将提取的DNA溶液作为模板DNA，加入PCR引物进行PCR反应，PCR反应完成后，琼脂糖凝胶电泳检测，出现目的条带者为XY型雄鱼，未出现该条带者为XX型雌鱼。