[发明专利]长度大于五十个碱基的寡核苷酸的基因芯片的信号检测方法

摘要

本发明公开了一种长度大于五十个碱基的寡核苷酸的基因芯片的信号检测方法。方法的步骤是：目的基因进行聚合酶链式反应扩增并检测；阳性产物约5μg100℃煮沸变性，冰上冷却；将检测用基因芯片用磷酸缓冲液润湿后，加入预杂交液进行预杂交；接着加入制备好的5μg变性DNA，60℃进行杂交；用洗膜液I洗涤2次，用洗膜液II洗涤；将芯片放入混有1×SYBR Green I的1×TE缓冲液染色；用TE缓冲液漂洗，重复2次；紫外光下或荧光显微镜下进行信号检测。该方法省却了对探针进行标记的繁杂程序，特别是避免了同位素标记对人体所造成的伤害和对环境造成的放射污染；应用该方法可以克服单纯运用聚合酶链式反应扩增可能造成的假阳性结果，使所得结果更灵敏、稳定、可靠。

主权项

1.一种长度大于五十个碱基的寡核苷酸的基因芯片的信号检测方法，其特征在于，方法的步骤为：1)运用特异引物对待测目的基因进行聚合酶链式反应扩增并用琼脂糖凝胶进行电泳检测，阳性PCR产物备用；2)聚合酶链式反应扩增产物5μg 90-100℃煮沸5-10min进行变性后，直接放入冰上冷却3-5min；3)将检测用基因芯片用0.25M的磷酸缓冲液，pH7.2，进行润湿后，加入预杂交液，55-65℃进行预杂交1-2小时；预杂交液为0.25mol/L磷酸缓冲液，pH7.2，1mmol/L乙二胺四乙酸，pH8.0，重量体积比为7％十二烷基磺酸钠，重量体积比为1％牛血清白蛋白；4)接着加入步骤2)的5μg变性DNA，55-65℃进行杂交10-12小时；5)用洗膜液I洗涤1-3次，每次15-20min；洗膜液I为2×SSC，重量体积比为0.1％十二烷基磺酸钠；2×SSC为0.3mol/L氯化钠，0.03mol/L柠檬酸钠，pH7.0；6)用洗膜液II洗涤15-20min；洗膜液II为0.1×SSC，重量体积比为0.1％十二烷基磺酸钠；7)将基因芯片放入混有1×SYBR Green I的1×TE缓冲液中染色5-10min；1×TE缓冲液为10mmo/L Tris碱，pH8.0；1mmol/L 乙二胺四乙酸，pH8.0；8)用TE缓冲液漂洗5-10min，重复2-3次；9)在254nm紫外光下或荧光显微镜下进行信号检测。