[发明专利]一种检测多药耐药基因多态性的方法

摘要

本发明属医学检验领域，涉及临床个体基因型的测定方法，具体涉及一种检测多药耐药基因多态性的方法。本发明方法采用变性高效液相色谱技术，检测多药耐药基因C3435T的单核苷酸多态性，敏感度和特异性可达96％～100％，明显高于常用的变性梯度凝胶电泳、温度梯度凝胶电泳、单链构像多态性和限制性片段长度多态性等变异检测技术；检测结果显示与DNA测序法完全相符。与直接测序法比较，本发明方法灵敏度和精确度高，检测更快速，成本更低。可用以预测病人服药后血药浓度与基因型的关系。

主权项

1、一种检测多药耐药基因多态性的方法，其特征是包括下述步骤，①样品预处理：抽取测试者全血，提取基因组DNA；②PCR反应：设计多药耐药基因(Genbank accession no：AC005068)第26外显子C3435T位点的引物，进行PCR反应，扩增出包括C3435T位点的产物；③DHPLC检测SNPs：直接用变性高效液相色谱分析上述PCR产物，其中，变性温度为58～65℃，流动相起始为45％～50％的A液和50％～55％的B液组成的梯度溶液，A液含0.1mol的三乙胺醋酸盐溶液，B液含0.1mol三乙胺醋酸盐溶液和20％～25％v/v的乙腈溶液；结束梯度为35％～40％的A液和60％～65％的B液；以0.5ml/min～1.0ml/min的速度带至DNA分离柱，洗脱液为100％的D液，其中含73％～77％v/v乙腈溶液。④根据洗脱峰形判断基因的多态性。