[发明专利]硅壳纳米颗粒检测SARS病毒基因组片断的方法

摘要

本发明公开了一种硅壳纳米颗粒检测SARS病毒基因组片断的方法，其特点是构建了用于SARS病毒检测的三明治模型，利用自制的修饰有与SARS病毒基因组特有序列互补的cDNA片断的硅壳磁性纳米探针对含有SARS病毒基因组的样本进行病毒基因组的提取与纯化，再在聚合酶链式反应(PCR扩增)对病毒基因片断进行扩增的基础上，用修饰有与SARS病毒基因片断特异序列互补的cDNA片断的硅壳荧光纳米探针及玻璃芯片对SARS病毒基因片断进行检测。本发明的检测方法具有快捷，灵敏度和特异性高，稳定性好的优点。

主权项

1、一种硅壳纳米颗粒检测SARS病毒基因组片断的方法，其特征在于：一、构建三明治结构的检测模型，即构建由将待检测的SARS病毒基因组片断、标记有荧光纳米检测信号的硅壳荧光纳米探针、以及能与玻璃芯片相联的寡核苷酸探针组成的类似三明治结构的检测模型；二、设计对SARS病毒进行基因片断检测的各探针序列和检测序列以及PCR扩增的引物序列，根据SARS基因组序列，通过BLAST分析SARS病毒基因组，筛选出与人类及其它病毒基因组无同源性的2个探针序列，其中之一作为硅壳磁性纳米探针的序列和硅壳荧光纳米探针的序列，另一段作为与玻璃芯片基片相连接的探针的序列；而包含这2段序列的100bp的序列作为SARS病毒基因组的检测序列；再用primer express2.0引物设计软件设计1套PCR引物；三、合成与制备用于SARS病毒基因病毒组提取与纯化的硅壳磁性纳米探针和对特异SARS病毒基因组片断进行荧光检测的硅壳荧光纳米探针及玻璃芯片，将制备的磁性纳米颗粒和表面氨基化荧光纳米颗粒用生物素化的牛血清白蛋白以及链霉亲和素修饰好，然后联接上合成的cDNA，制备成修饰有与SARS病毒基因组具有35个碱基互补cDNA序列的硅壳磁性纳米探针和荧光纳米探针；在醛基化玻璃芯片上修饰生物素化的牛血清白蛋白以及链霉亲和素制备成玻璃芯片基片；四、检测，其具体过程为：1)杂交：硅壳磁性纳米探针与SARS病毒基因片断及其它非SARS病毒基因片断的样品进行杂交，2)磁分离：利用硅壳磁性纳米颗粒的磁性分离作用将SARS病毒基因组从混合样品中分离和纯化出来；3)PCR扩增：纯化的SARS病毒基因组通过一对特定的引物进行PCR扩增，得到100bp的扩增产物；4)荧光检测：与扩增产物有35个碱基互补序列的荧光纳米探针再和扩增产物以及同样修饰有34个碱基互补序列的玻璃芯片以一种类似三明治结构的模型进行杂交，而后用激光共聚焦荧光显微镜对芯片进行扫描检测。