[发明专利]制备性基因重组蜘蛛拖丝蛋白的分离纯化方法无效
| 申请号： | 03125097.1 | 申请日： | 2003-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN1450169A | 公开（公告）日： | 2003-10-22 |
| 发明（设计）人： | 李敏;黄智华;章文贤;涂桂云 | 申请（专利权）人： | 福建师范大学 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K14/435;C07K1/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 350007 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及制备性基因重组蜘蛛拖丝蛋白(简称蛛丝蛋白)工程菌表达目的蛋白质的分离纯化，得到高纯度可利用的蛛丝蛋白的方法。其特征是工程菌细胞首先用1/15M磷酸盐缓冲液(pH7.0)洗涤菌体，离心后，以1∶5比例加入50mMTris－HCl(pH8.0)/1mMPMSF/1mMEDTA，反复冻融3次；4℃，50HZ超声震荡26～40sec，间隔30sec，反复10～15次破碎细胞；目的蛋白用10％醋酸调至pH5.0～6.5，4℃静置过夜，离心除去杂蛋白；上清液加热到45～64℃，离心，上清液用1MNaOH调至pH8.5～9.2，20％硫酸铵沉淀目的蛋白，4℃保存，备用。本发明分离纯化步骤简单，SDS－PAGE鉴定基因重组蛛丝蛋白质纯度＞85％。该方法不需要昂贵的蛋白质分离纯化介质，成本低，对于规模化制备特别适合。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 基因 重组 蜘蛛 蛋白 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种制备性基因重组蜘蛛拖丝蛋白的分离纯化方法，其特征是带有蜘蛛拖丝蛋白基因的重组工程菌在发酵罐规模化培养后，细胞经冻融、超声裂解，目的蛋白通过酸化、加热、硫酸铵沉淀等步骤纯化制备。
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