[发明专利]双对比增强的单碱基替换型突变的寡核苷酸微阵列检测法

摘要

本发明涉及一种用于寡核苷酸微阵列检测单碱基替换型突变的探针设计以及检测方法，该方法命名为信号增强双对比法。该方法使用四条长度为8－50nt的寡核苷酸探针检测一个单碱基替换型突变，四条探针为：野生型序列完全匹配探针(Pw1)；突变型序列完全匹配探针(Pt1)；Pw1探针序列中引入一个人工错配碱基探针(Pw2)。Pt1探针序列中引入一个人工错配碱基(Pt2)。上述四条探针在寡核苷酸微阵列上与相应的PCR标记产物杂交后，产生四个强度不等的杂交信号，与Pw1，Pt1，Pw2，Pt2相对应的杂交信号强度表示为Sw1，St1，Sw2，St2。通过公式运算得出信号差异值(Z)：Z＝log[(Sw1×Sw2)/(St1×St2)]。当Z值＞0时，表示检测物为野生型纯合子；当Z值＝0，或非常接近于0时，表示突变型和野生型各占一半，即检测物为杂合子；当Z＜0时，表明检测物为野生型纯合子。

主权项

1.一种用于寡核苷酸微阵列，检测替换型单碱基突变的新方法。该方法命名为信号增强双对比法。其特征在于：在原有的两条与野生型和突变型完全匹配的探针(Pw1，Pt1)基础上，引入两条等长的、带有一个人工错配碱基的、与野生型和突变型匹配的探针(Pw2，Pt2)。杂交检测结果通过4条探针的显示信号(Sw1，Sw2，St1，St2)，按公式计算差异值(Z)：Z＝log[(Sw1×Sw2)/(St1×St2)]，当Z值＞0时，表示检测物为野生型纯合子；当Z值＝0，或非常接近于0时，表示突变型和野生型各占一半，即检测物为杂合子；当Z＜0时，表明检测物为野生型纯合子。