[发明专利]醋酸奥曲肽生产工艺

摘要

本发明涉及一种醋酸奥曲肽生产工艺，其特征在于：由下列工艺步骤组成，取Boc－Thr(Ac)－Wang树脂装入反应容器中，加入TFA与二氯甲烷的混合液反应，洗涤后加三乙胺与二氯甲烷混合液反应，加入Fmoc－Cys(Trt)－OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，卡氏法检测氨基为阳性用接肽试剂补接后至卡氏法检测氨基为阴性，加入封头试剂、脱帽试剂，洗涤，加Fmoc－Thr(tBu)－OH，TBTU，HOBt，加Fmoc－Lys(Boc)－OH，TBTU，HOBt，溶解，加Fmoc－D－Trp(Boc)－OH，TBTU，HOBt，接肽试剂溶解，加Fmoc－Phe－OH，TBTU，HOBt，加入反应容器，洗涤抽干，加Fmoc－Cys(Trt)－OH，TBTU，HOBt，加Fmoc－D－Phe－OH，TBTU，HOBt，干燥得八肽树脂，八肽树脂中加入脱侧链试剂，乙醇，硼氢化钠和乙醇溶液，乙醇洗涤，加醋酸及滴加NHOH至pH值7.8，用冰醋酸调至pH值5.5，滤液分批经纯化后冻干得白色疏松块状成品。本发明的优点利用硼氢化钠还原取代价格昂贵的L－Thr(ol)，可大大降低醋酸奥曲肽生产合成的成本。

主权项

1.醋酸奥曲肽生产工艺，其特征在于：由下列工艺步骤组成，(1)取Boc-Thr(Ac)-Wang树脂(1.01mmol/g，1.01mmol)装入反应容器中，用DMF浸泡，洗涤，加入TFA与二氯甲烷的混合液，25℃反应半小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加三乙胺与二氯甲烷混合液，25℃反应十分钟，分别用DMF，二氯甲烷各洗涤三次，抽干，加入Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，25℃反应一小时，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(2)述试剂卡氏法检测氨基为阳性的，用接肽试剂补接后重复用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干至卡氏法检测氨基为阴性，加入封头试剂，25℃反应一小时，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，加入脱帽试剂，25℃反应十二分钟，用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(3)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Thr(tBu)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(4)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Lys(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(5)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(6)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(7)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，(8)在上述脱帽反应后的树脂中，加Fmoc-D-Phe-OH，TBTU，HOBt，用接肽试剂溶解，加入反应容器，25℃反应一小时，抽干，分别用DMF，无水乙醇，二氯甲烷，DMF各洗涤三次，抽干，放入真空干燥器中干燥，得八肽树脂，(9)将八肽树脂转移到茄形瓶中，冷却下加入脱侧链试剂，25℃搅拌二小时，抽干，二氯甲烷，DMF，无水乙醇各洗涤三次，抽干，NHOH (10)取步骤(9)的八肽树脂转移到茄形瓶中，加入50％的乙醇，25℃搅拌在一小时内滴加硼氢化钠和乙醇溶液，25℃搅拌四小时后过滤，用50％的乙醇分次洗涤，再将滤液和洗涤合并，加醋酸至PH值得7，40℃下减压浓缩，(11)在上述浓缩液中加水，搅拌中滴加氨水至PH值7.8，室温空气中氧24小时，用冰醋酸调至PH值5.5，加活性碳搅拌30分钟后过滤，(12)滤液分批经纯化后冻干得白色疏松块状成品，上述英文缩写表：Boc-Thr(Ac)-Wang树脂 叔丁氧羰酰-苏氨酸(乙酰基)王树脂TFA 三氟乙酸DMF 二甲基甲酰胺TBTU 氧-(1氢-苯并三氮唑基)-四甲基脲-四氟化硼HOBt 1-羟基苯并三氮Fmoc-Cys(Trt)-OH 芴甲氧羰基-半胱氨酸(三苯甲基)Fmoc-Thr(tBu)-OH 芴甲氧羰基-苏氨酸(叔丁基)Fmoc-Lys(Boc)-OH 芴甲氧羰基-赖氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-D-Trp(Boc)-OH 芴甲氧羰基-D-型-色氨酸(叔丁氧 酰)Fmoc-Phe-OH 芴甲氧羰基-苯丙氨酸Fmoc-D-Phe-OH 芴甲氧羰基-D-型苯丙氨酸