[发明专利]一种检测端粒酶活性的方法

摘要

本发明涉及一种检测端粒酶活性的方法，通过提取细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA，克隆含有motif－T的cDNA序列的目的片段，合成特异探针，进行原位杂交，然后检测是否有hTERTmRNA的转录，从而确定是否具有端粒酶的活性。由于对motif－T的检测是结构性检测，测量结果的灵敏度和特异性强，从而为端粒酶的活性检测提供一个精确、简便的方法，因而本发明在肿瘤的诊断、治疗和预后的评估等方面，以及对细胞系的基础研究，都具有十分重要的应用价值。

主权项

1、一种检测端粒酶活性的方法，包括以下步骤：(1)从已知具有端粒酶活性的人类细胞中提取总RNA，用反转录酶试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用PCR技术，用合成的特异性PCR引物，特异的扩增含motif-T编码序列的cDNA片段，经纯化后，重组到质粒中，转化、筛选、鉴定、测序，确认为是目的序列后，纯化质粒；然后(2)用内切酶从质粒上切下片段作为模板，标记序列，合成双链的cDNA探针，鉴定、纯化和测定探针滴度；然后(3)探针与已知的端粒酶阳性和阴性细胞或组织进行原位杂交呈色，在荧光显微镜下观察，检测是否有hTERTmRNA的转录，从而通过确定是否具有端粒酶的活性，来检验该探针的有效性；然后(4)使用该探针对其他大量的临床肿瘤样品和实验室的永生化细胞系进行检测，评价其是否存在端粒酶的活性。