[发明专利]抗HSV感染和镇痛的人甲硫氨酸脑啡肽干扰素α－m融合蛋白制剂

摘要

采用人工设计、化学合成、Over－lappingPCR、蛋白质变性、复性、纯化等技术，发明了具有较高抗病毒活性和外周镇痛作用的甲硫氨酸脑啡肽干扰素α－m融合蛋白。融合蛋白(Enk－Met－IFNα－m，EI)可以作为药物的活性组分制成不同的剂型外用，可治疗HSV－1、HSV－2感染引起的单纯疱疹，又能起到镇痛的作用。这种以人甲硫氨酸脑啡肽干扰素α－m融合蛋白为活性成分的制剂，最主要的用途包括：制成滴眼液，可用于治疗HSV－1感染引起的眼疾；作为涂抹剂，可用于HSV－2感染引起的生殖器疱疹；作为外用镇痛剂，可治疗皮肤灼伤、炎症反应引起的疼痛。

主权项

1.一种外用制剂，它含有作为有效成份的基因工程20千道尔顿人甲硫氨酸脑啡肽干扰素α-m融合蛋白和药物学上可接受的载体或稀释剂。其特征在于：a一种人甲硫氨酸脑啡肽-干扰素αm融合蛋白的制法，采用人工设计、化学合成的人IFNαm基因，并用Over-lappingPCR技术搭建克隆甲硫氨酸脑啡肽干扰素αm融合蛋白基因，其结构式如下：TACGGTGGTTTCATGTCTGGTTCTTGTGATCTGCCGGAAACCCACTCTCTAGACAACCGTCGTACCCTGATGCTGCTGGCTCAGATGTCTCGTATCTCTCCGTCTTCTTGCCTGGACCCGCGTCACGACTTCGGTTTCCCGCAGGAAGAATTTGACGGTAACCAGTTCCAGAAAGCTCCGGCTATCTCTGTTCTGCACGAACTGATCCAGCAGATCTTCAACCTGTTCACCACCAAAGACTCTTCTGCTGCTTGGGACGAAGACCTGCTGGACAAATTCGACACCGAACTGTACCAGCAGCTGAACGACCTGGAAGCTTGTGTTATGCAGGAAGAACGTGTTGGTGAAACCCCGCTGATGAACGCTGACTCTATCCTGGCTGTTAAGAAATACTTCCGTCGTATCACCCTGTACCTGACCGAAAAGAAATACTCTCCGTGTGCTTGGGAAGTTGTTCGTGCTGAAATCATGCGTTCTCTGTCTCTGTCTACCAACCTGCAGGAACGTCTGCGTCGTAAAGAA人干扰素αm由166个氨基酸组成，甲硫氨酸脑啡肽由5个氨基酸组成，甲硫氨酸脑啡肽在人干扰素αm的N端通过连接子Ser-Gly-Ser进行融合，总计522bp。5’和3’克隆构建时，加起始密码子和终止密码子，以及EcoRI、PstI的酶切位点。从基因的人工设计、合成到搭建克隆，由于采用了大肠杆菌的偏爱密码子，构建的融合基因能够在大肠杆菌中高效表达，产生大量的融合蛋白，而且其氨基酸序列没有改变。b其中基因工程20千道尔顿人甲硫氨酸脑啡肽干扰素α-m融合蛋白具有SEQIDNo：2的氨基酸序列，结构式如下：TyrGlyGlyPheMetSerGlySerCysAspLeuProGluThrHisSerLeuAspAsnArgArgThrLeuMetLeuLeuAlaGlnMetSerArgIleSerProSerSerCysLeuAspProArgHisAspPheGlyPheProGlnGluGluPheAspGlyAsnGlnPheGlnLysAlaProAlaIleSerValLeuHisGluLeuIleGlnGlnIlePheAsnLeuPheThrThrLysAspSerSerAlaAlaTrpAspGluAspLeuLeuAspLysPheAspThrGluLeuTyrGlnGlnLeuAsnAspLeuGluAlaCysValMetGlnGluGluArgValGlyGluThrProLeuMetAsnAlaAspSerIleLeuAlaValLysLysTyrPheArgArgIleThrLeuTyrLeuThrGluLysLysTyrSerProCysAlaTrpGluValValArgAlaGluIleMetArgSerLeuSerLeuSerThrAsnLeuGlnGluArgLeuArgArgLysGlu