[发明专利]带有氯霉素抗性的分泌高产戊二酰－7－氨基头孢烷酸酰化酶的菌株有效
| 申请号： | 00125106.6 | 申请日： | 2000-09-08 |
| 公开（公告）号： | CN1283697A | 公开（公告）日： | 2001-02-14 |
| 发明（设计）人： | 王恩多;李勇;郑勇刚;陈剑峰;姜卫红;赵国屏;杨蕴刘 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海生物化学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21 |
| 代理公司： | 上海华东专利事务所 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 20003*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种从假单胞菌中克隆并经基因工程改造得到的长为2.5kb的重组GL－7ACA酰化酶基因及其表达元件和信号肽的序列。构建了该基因的高分泌表达重组质粒pSuperCA1S,该质粒转化至大肠杆菌菌株TG1中,得到的基因工程菌株TG1/pSuperCA1S在普通的LB培养基中,无需添加诱导剂即能高效分泌表达GL－7ACA酰化酶,比活力可达到每克菌体120个单位。 | ||
| 搜索关键词： | 带有 氯霉素 抗性 分泌 高产 戊二酰 氨基 头孢 烷酸酰化酶 菌株 | ||
【主权项】：
1、一种重组戊二酰-7-氨基头胞烷酸酰化酶基因，其特征在于它编码GL-7ACA酰化酶的核苷酸序列以及相应的氨基酸序列如下：1CTGGCCGAGCCGACCTCGACGCCGCAGGCGCCGATTGCGGCCTATAAACCGAGAAGCAATGAGATCCTG691LeuAlaGluProThrSerThrProGlnAlaProIleAlaAlaTyrLysProArgSerAsnGluIleLeu2370TGGGACGGCTACGGCGTCCCGCACATCTACGGGGTCGACGCGCCCTCAGCCTTCTACGGCTACGGCTGG13824TrpAspGlyTyrGlyValProHisIleTyrGlyValAspAlaProSerAlaPheTyrGlyTyrGlyTrp46139GCCCAGGCGCGCAGCCACGGCGACAATATCCTGCGCCTGTATGGAGAAGCGCGGGGCAAGGGGGCCGAA20747AlaGlnAlaArgSerHisGlyAspAsnIleLeuArgLeuTyrGlyGluAlaArgGlyLysGlyAlaGlu69208TACTGGGGCCCGGATGACGAACAGACGACCGTCTGGCGTCTGACCAACGGCGTGCCGGAGCGTGCCCAG27670TyrTrpGlyProAspAspGluGlnThrThrValTrpArgLeuThrAsnGlyValProGluArgAlaGln138277CAGTGGTATGCGCAGCAGTCGCCTGATTTCCGCGCCAACCTCGACGCCTTCGCGGCGGGCATCAACGCC345139GlnTrpTyrAlaGlnGlnSerProAspPheArgAlaAsnLeuAspAlaPheAlaAlaGlyIleAsnAla207346TATGCGCAGCAGAACCCCGACGACATCTCGCCCTGACTGCGGCAGGTGCTGCCGGTCGCCGGCGCCGAC414208TyrAlaGlnGlnAsnProAspAspIleSerProAspValArgGlnValLeuProValAlaGlyAlaAsp276415GTGGTGGCCCACGCCCATCGCCTGATGAACTTCCTCTATGTCGCGTCGCCCGGCCGCACCCTGGGCGAG483277ValValAlaHisAlaHisArgLeuMetAsnPheLeuTyrValAlaSerProGlyArgThrLeuGlyGlu345484GGCGACCCGCCGGACCTGGCCGATCAGGGATCCAACTCCTGGGCTGTGGCGCCGGGCAAGACGGCCAAT552346GlyAspProProAspLeuAlaAspGlnGlySerAsnSerTrpAlaValAlaProGlyLysThrAlaAsn414553GGGAACGCCCTGCTGCTGCAGAACCCGCACCTGTCCTGGACGACGGACTACTTCACCTACTACGAGGCG621415GlyAsnAlaLeuLeuLeuGlnAsnProHisLeuSerTrpThrThrAspTyrPheThrTyrTyrGluAla483622CATCTCTTCACGCCGGACTTCGAAATCTATGGCGCGACCCAGATCGGCCTGCCGGTCATCCGCTTCGCC690484HisLeuPheThrProAspPheGluIleTyrGlyAlaThrGlnIleGlyLeuProValIleArgPheAla552691TTCAATCAGCGGATGGGCATCACCAATACCGTCAACGGCATGGTGGGGGCCACCAACTATCGGCTGACG759553PheAsnGlnArgMetGlyIleThrAsnThrValAsnGlyMetValGlyAlaThrAsnTyrArgLeuThr621760CTTCAGGGCGACGGCTATCTGTATGACGGTCAGGTGCGGCCGTTCGAGCGGCGTCAGGCTTCGCATCGC828622LeuGlnGlyAspGlyTyrLeuTyrAspGlyGlnValArgProPheGluArgArgGlnAlaSerHisArg690829CTGCGTCAGGCGGACGGGTCGACGGTCGACAAGCCGTTGGAGATCCGTTCCAGCGTCCATGGCCCGGTC897691LeuArgGlnAlaAspGlySerThrValAspLysProLeuGluIleArgSerSerValHisGlyProVal759898TTCGAGCGCGCGGACGGCACGGCCGTCGCCGTTCGGGTCGCCGGTCTGGATCGGCCGGGCATGCTCGAG966760PheGluArgAlaAspGlyThrAlaValAlaValArgValAlaGlyLeuAspArgProGlyMetLeuGlu828967CAGTATTTCGACATGATCACGGCGGACAGCTTCGACGACTACGAAGCCGCTATGGCGCGGATGCATGTG1035829GlnTyrPheAspMetIleThrAlaAspSerPheAspAspTyrGluAlaAlaMetAlaArgMetHisVal1036CCGACCTTCAACATCGTCTACGCCGACCGCGAAGGGACCATCAACTACAGCTTCACGGCGTGGCGCCCA1104ProThrPheAsnIleValTyrAlaAspArgGluGlyThrIleAsnTyrSerPheThrAlaTrpArgPro1105AACGGGCCGAGGGCGACATCGCCTTCTGGCAGGGGCGCGGCCGGGCCATTCCTCGCGTTACTGTGGACT1173AsnGlyProArgAlaThrSerProSerGlyArgGlySerAlaGlyProPheLeuAlaLeuLeuTrpThr1174GAGACACACCCCTGGACGATCTGCCGCGCGTCACCAATCCGCCGGCCCGCTTCGTGCAGAACTCCAATG1242GluThrHisProTrpThrIleCysArgAlaSerProIleArgArgProAlaSerCysArgThrProMet1243ATCCGCCGTGGACGCCGACCTGGCCCGTCACCTACACGCCCAGGGACTTCCCCTCCTATCTGGCGCCCC1311IleArgArgGlyArgArgProGlyProSerPROThrArgProGlyThrSerProProIleTrpArgPro1312AGACGCGCACTCCCTGCGCGCTCAGCAAAGCGTGCGTCTGATGTCGAGAACGACGACCTGAGGCTGGAA1380ArgArgAlaLeuProAlaArgSerAlaLysArgAlaSerAspValGluAsnAspAspLeuArgLeuGlu1381CGCTTCATGGCGCTGCAGTTGAGCCACCGCGCCGTCATGGCCGACCGCACCTTGCCGGACCTGATCCCG1449ArgPheMetAlaLeuGlnLeuSerHisArgAlaValMetAlaAspArgThrLeuProAspLeuIlePro1450GCCGCCCTGATCGACCCCGATCCCGAGGTCCAGGCGGCGGCGCGCCTGCTGGCGGCGTGGGATCGTGAG1518AlaAlaLeuIleAspProAspProGluValGlnAlaAlaAlaArgLeuLeuAlaAlaTrpAspArgGlu1519TTCACCAGCGACAGCCGCGCCGCCCTGCTGTTCGAGGAATGGGCGCGTCTGTTCGCCGGCCAGAATTTC1587PheThrSerAspSerArgAlaAlaLeuLeuPheGluGluTrpAlaArgLeuPheAlaGlyGlnAsnPhe1588GCCGGCCAGGCGGGTTTCGCCACGCCCTGGTCGCTGGATAAGCCGGTCAGCACCCCCACGGCGTCCGCT1656AlaGlyGlnAlaGlyPheAlaThrProTrpSerLeuAspLysProValSerThrProTyrGlyValArg1657GACCCCAAGGCCGCCGTCGATCAACTGCGGACCGCCATCGCCAACACCAAGCGCAAATACGGCGCGATC1725AspProLysAlaAlaValAspGlnLeuArgThrAlaIleAlaAsnThrLysArgLysTyrGlyAlaIle1726GACCGCCCGTTCGGCGACGCCTCGCGCATGATCCTGAACGATGTGATTGTTCCGGGCGCCGCCGGCTAC1794AspArgProPheGlyAspAlaSerArgMetIleLeuAsnAspValIleValProGlyAlaAlaGlyTyr1795GGCAACCTGGGTTCCTTCCGGGTCTTCACCTGGTCCGATCCTGACGAAAACGGGGTTCGCACGCCCGTC1863GlyAsnLeuGlySerPheArgValPheThrTrpSerAspProAspGluAsnGlyValArgThrProVal1864CACGGCGAGACGTGGGTGGCGATGATCGAGTTCTCCACCCCGGTGCGGGCCTATGGCCTGATGAGCTAC1932HisGlyGluThrTrpValAlaMetIleGluPheSerThrProValArgAlaTyrGlyLeuMetSerTyr1933GGCAATTCTCGCCAGCCGGGCACGACGCACTACAGCGATCAGATCGAACGCGTGTCGCGGGCCGACTTC2001GlyAsnSerArgGlnProGlyThrThrHisTyrSerAspGlnIleGluArgValSerArgAlaAspPhe2002CGCGAGCTGTTGCTGCGGCGAGAGCAGGTCGAGGCCGCCGTCCAGGAACGCACGCCCTTCAACTTCAAG2070ArgGluLeuLeuLeuArgArgGluGlnValGluAlaAlaValGlnGluArgThrProPheAsnpheLys2071CCATGAAAGGCCTGACCATGACACGACGGATTGGGTATTCGGCGGGCGCGGCGTCTCTGGCGCTGATGG2139ProTCGCCGCCTCTGGAGCGGCGGCGGGCGAGCCGGCCTTCACTTCGGTTCAGGTCGAGGGCTTTTCGGTACCGGGCGCGCTGTCGAAGGCCTGGGCCGACTTCGACAACGACGGCGACCTGGACCTGGCCGTCTCCTGGAAGAGCGGCGAAGTTCGCCTCTATCTCAACGACGGCGGCGCTTTCGTCAACATCGGCCCGGAGATGGGCTGCCTACCTCGGGCATCGAGATTCGCGGGTTGAGCTGGGGCGACTTCGACGGCGATGGGTTCGTCGAC
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