[发明专利]定量测量荧光共振能量转移效率的方法

摘要

本发明属于一种可作为生物、医学、光学、物理、化学等学科类的科研与检测，测量供体—受体的相互作用及其能量共振转移效率的测量方法。1)根据供体受体的发射谱选择适当的滤光片；2)根据供体受体的发射谱计算得到系数K_d1，K_d2，K_a1和K_a2；3)用激发光选择性地激发供体；4)测量两个通道的荧光强度计算得到比值Ratio；5)将Ratio代入公式(a)计算得到荧光共振能量转移效率E；6)将E代入公式(b)计算得到供体受体间的距离r。

主权项

1、一种定量测量荧光共振能量转移效率的方法，利用对供体和受体两个通道的有关参数进行测量，并通过对相关数据的处理后而得出其荧光共振能量转移效率和供体受体间的距离；其特征在于，对两个通道性质要求：(1)第一个通道必须包括部分或全部供体荧光发射谱；(2)第二个通道必须包括部分或全部受体荧光发射谱； (3)激发光不在两个通道的光谱范围；(4)两个通道的探测谱范围不能完全相同；所说的定量测量荧光共振能量转移效率方法的步骤为：(1)根据供体和受体的发射谱选择适当的滤光片，所说的滤光片应满足以上所说的两个通道性质的要求；(2)根据供体和受体的发射谱以及选择的滤光片计算得到系数Kd1，Kd2，Ka1和Ka2；其系数Kd1，Kd2，Ka1和Ka2分别为：$k_{d1}=\frac{\underset{\mathrm{CH}1}{\int }\mathrm{spd}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }}{\underset{-\infty }{\overset{+\infty }{\int }}\mathrm{spd}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }},$ $k_{d2}=\frac{\underset{\mathrm{CH}2}{\int }\mathrm{spd}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }}{\underset{-\infty }{\overset{+\infty }{\int }}\mathrm{spd}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }},$ $k_{a1}=\frac{\underset{\mathrm{CH}1}{\int }\mathrm{spa}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }}{\underset{-\infty }{\overset{+\infty }{\int }}\mathrm{spa}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }},$ $k_{a2}=\frac{\underset{\mathrm{CH}2}{\int }\mathrm{spa}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }}{\underset{-\infty }{\overset{+\infty }{\int }}\mathrm{spa}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }};$ 其中：spd(λ)为供体发射谱；spa(λ)为受体的发射谱；(3)用激发光选择性地激发供体；(4)测量两个通道的荧光强度，并由此计算得到第二通道与第一通道的荧光光强比值Ratio；$\mathrm{Ratio}=\frac{\underset{\mathrm{CH}2}{\int }{h}_1\left(\lambda \right)\mathrm{sp}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }}{\underset{\mathrm{CH}1}{\int }{h}_2\left(\lambda \right)\mathrm{sp}\left(\lambda \right)\mathrm{d\lambda }},$ 其中：sp(λ)为供体—受体对的荧光发射谱；h1(λ)和h2(λ)分别表示第一个通道和第二个通道的带通性质；(5)将Ratio代入公式(a)计算得到荧光共振能量转移效率E；公式(a)为：$\frac{{\phi }_{A}E}{1-E}=\frac{\mathrm{Ratio}·K_{d1}-K_{d2}}{K_{a2}-\mathrm{Ratio}·K_{a1}},$ 其中φA是受体的量子产额；(6)将E代入公式(b)计算得到供体受体间的距离r；公式(b)为：$E=\frac{R_0^6}{r^6+R_0^6},$ 其中：R0是Frster临界距离。