[发明专利]模块表达序列标签制作方法

摘要

本发明公开了一种模块表达序列标签的制作方法。选择蛋白模体氨基酸序列设计特异简并引物，分离和定义生物样本基因的模块表达序列标签。富集模块表达序列标签制成模块表达序列标签基因芯片，并构建进行全方位检索、查询、电子拼接的模块表达序列标签数据库。本发明能够为选择克隆与生物学表型密切相关的基因提供丰富的功能信息，以期作为功能基因组学、疾病诊断和药物筛选等生物技术领域研究的一种基本技术。

主权项

1.一种模块表达序列标签的制作方法，其特征在于它的步骤为： 1)收集生物物种多种表型及多种发育阶段样本，提取核酸； 2)分离完成的样本为信使核糖核酸则逆转录合成互补脱氧核糖核酸第一 链；分离完成的样本是脱氧核糖核酸则直接用于模块脱氧核糖核酸片段分离； 3)通过比较生物种类已知的蛋白模体，选择目标生物样本偏爱的蛋白模体 组成序列为蓝本； 4)针对目标生物样本偏爱的氨基酸三联核苷酸密码子设计含保守的蛋白模 体序列的聚合酶链式反应简并引物； 5)按蛋白模体序列信息分类聚合酶链式反应引物，并两两组合为一对聚 合酶链式反应扩增引物对； 6)以所述分离合成完成的互补脱氧核糖核酸样本或脱氧核糖核酸样本为模 板，进行聚合酶链式反应扩增，并在反应体系中掺入放射性同位素进行标记； 7)以脱氧核糖核酸测序胶分离技术对聚合酶链式反应扩增产物进行分离并 放射自显影。利用放射自显影提供的聚合酶链式反应基因表达图谱从脱氧核糖 核酸测序胶中回收特异性扩增的模块脱氧核糖核酸片段，并对每一回收的脱氧 核糖核酸片段进行聚合酶链式反应重扩增和琼脂糖凝胶电泳鉴定； 8)对每一重扩增片段，以已知聚合酶链式反应引物为测序引物进行脱氧核 糖核酸序列分析。所获序列经生物信息学处理后，建立模块表达序列标签库； 9)选择不同的模体引物组合重复5)～8)过程； 10)富集获得的模块脱氧核糖核酸片段构建模体表达序列标签微阵列形式 的基因芯片； 11)富集所有模块的引物序列、每条模块表达序列标签的脱氧核糖核酸序 列、依模块信息转译的蛋白序列及其功能预报，以建立一个可进行全方位检索、 查询、电子拼接的数据库。