本发明公开了一种适配中药饲料添加剂的纤维素酶的构建方法,涉及基因工程技术领域。纤维素酶核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明得到一种在肠胃环境温度下,具有更高酶催化活性的单体纤维素酶。构建的酶为一种新型的,能在肠胃环境温度下高效促进中药纤维素的溶解,进而促进有效成分快速释放的纤维素酶。
本发明公开了一种提高纤维素酶活的基因、蛋白和菌株,基因为trans1基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;菌株为黑曲霉Trans,由pCAMBIA1300‑trans1重组质粒转化至黑曲霉CBS S13.88而得;菌株的构建方法包括:对pCAMBIA1300质粒和trans1基因进行Sal I和Hind III酶切,多酶切产物电泳、胶回收;对胶回收产物进行连接,得重组质粒pCAMBIA1300‑trans1;将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中,并提取重组质粒;将提取的重组质粒转化农杆菌中,并以农杆菌介导侵染黑曲霉菌,获得黑曲霉Trans菌。
本发明公开了一种促进中药饲料添加剂在肠道释放的纤维素酶,纤维素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,编码该酶的序列如SEQ ID NO.2所示;纤维素酶的生产方法,包括:以合成的序列Endo1为模板,进行PCR,获得目的基因;对目的基因和pRSFduet‑1质粒进行BamHI和EcoRI双酶切,然后连接酶切产物,获得重组质粒pET28a‑endo;将重组质粒pET28a‑endo转化至大肠杆菌感受态细胞中,获得转化菌株;对转化菌株进行诱导培养,离心、取上清、纯化,得纤维素酶。