本发明涉及一种抗CK6重组兔单克隆抗体及其应用,所述抗CK6重组兔单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示;所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。相比市售的抗CK6单克隆抗体,本发明提供的抗CK6重组兔单克隆抗体,与CK6蛋白具有更高亲和力,可高特异性和高灵敏度地识别和检测肿瘤细胞或免疫细胞上CK6蛋白的表达,可应用于免疫组织化学(IHC)、间接ELISA、免疫印记(Western blotting)、抗体芯片制备、流式细胞术等检测与筛查领域,有利于获得更准确的检测和评估结果,并降低检测成本和背景信号的干扰。