一种慢病毒介导的哺乳动物细胞特异性过表达miRNA的方法,本发明涉及一种慢病毒介导的哺乳动物细胞特异性过表达miRNA的方法。本发明的目的是为了解决目前的miRNA表达系统无法实现miRNA互补对单一miRNA的特异性表达的问题,利用shRNA系统,将miRNA成熟序列作为上游的正义序列,下游与miRNA成熟序列互补的反义序列按照T to C和A to G的规则进行突变,将突变后的RNA二级颈环结构克隆到载体上,然后进行病毒包装,建立稳转突变后的RNA二级颈环结构的细胞系。本发明能够过表达互补miRNA对中其中单个特异的miRNA,本发明应用于miRNA过表达领域。