本发明公开了ITS序列作为DNA条形码在鉴定嘉兴槜李中的应用及鉴定方法,属于分子鉴定技术领域。所述鉴定方法包括:利用PCR扩增待测样品的ITS序列并进行测序,如果ITS序列的165bp碱基为“T”、195bp碱基为“T”,则判定待测样品为嘉兴槜李。本发明还公开了一种鉴别嘉兴槜李早熟品种和晚熟品种的方法,如果ITS序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,则判定待测样品为嘉兴槜李早熟品种;如果ITS序列的碱基序列如SEQ ID NO.2所示,则判定待测样品为嘉兴槜李晚熟品种。本发明利用ITS序列作为DNA条形码鉴定嘉兴槜李,检测准确性高、可重复性高,鉴定时间短。