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[发明专利]一种近岸海水中弧菌的检测方法-CN202010670320.3在审
发明人： 汪光义;森法昌伊塔文;何艺科;郭嘉懿 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-07-13 - 公布日： 2022-01-14 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种近岸海水中弧菌的检测方法，包括如下步骤：1)针对弧菌特有基因设计上、下游引物；对阳性对照弧菌进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行电泳检测，将呈现的目的条带切胶回收，进行测序；2)构建标准质粒模板；3)建立Q‑PCR定量标准曲线：4)环境样品测定：本发明的方法，缩短了检测时间，由原方法的10‑12天，缩短为1天，在完成标准曲线的情况下仅需3‑4个小时，其次，克服了现有方法无法测定不可培养性弧菌的问题，提高了鉴别的准确度。
一种近岸海水弧菌检测方法

[发明专利]一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的筛选方法-CN201910859437.3在审
发明人：刘宪华;李建涛;汪光义;叶会科;张赛 -专利权人：天津大学青岛海洋技术研究院
申请日： 2019-09-11 - 公布日： 2021-03-12 - 主分类号： C12Q1/04 文献下载
摘要：一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的筛选方法，具体是，将野生型裂殖壶菌菌株经过ARTP诱变处理，经烯草酮平板培养基定向初筛，磷酸香草醛法和摇瓶发酵培养测定的DHA产量为复筛，筛选后获得高产DHA菌株。本发明涉及到的高产DHA筛选方法具有操作简单，筛选成功率高，能快速获取大量目的菌株等诸多优势。
一种高产 dha 裂殖壶菌突变菌株筛选方法

[发明专利]一种分离破囊壶菌的培养基及其纯化方法-CN201910859459.X在审
发明人： 汪光义;温帅;叶会科;何艺科;白默涵 -专利权人：天津大学青岛海洋技术研究院
申请日： 2019-09-11 - 公布日： 2021-03-12 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：一种分离破囊壶菌的培养基及其纯化方法，制备破囊壶菌培养基：Glucose 1‑5g、Peptone 0.5‑2g、Yeast extract powder 0.5‑2g、谷氨酸钠0.5‑1g、玉米浆0.5‑1g、Agar 15‑20g、海盐20‑30g、青霉素G 0.5~1g、Streptomycin 0.5~1.5g、利福平50~100mg、Nystatin 5~20mg、H2O 1L，进行菌株分离，形态学观察，18S rRNA测序；该方法能直接从海洋水体中和湿地中腐烂状的海草上分离出破囊壶菌，培养基成分简单，成本低廉、操作方便可作为实验室用破囊壶菌的分离培养方法。
一种分离破囊壶菌培养基及其纯化方法

[发明专利]一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的诱变育种方法-CN201910860231.2在审
发明人：刘宪华;李建涛;汪光义;张赛;叶会科 -专利权人：天津大学青岛海洋技术研究院
申请日： 2019-09-11 - 公布日： 2021-03-12 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的诱变育种方法，具体是，将野生型裂殖壶菌菌株经过两轮ARTP诱变处理，摇瓶培养筛选后获得高产菌株。本发明涉及到的高产DHA诱变育种方法具有操作简单安全，应用范围广，诱变成功率高，能快速获取大量目的突变体等诸多优势。
一种高产 dha 裂殖壶菌突变菌株诱变育种方法

[发明专利]一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法-CN202011317316.5在审
发明人： 汪光义;刘媛媛;谢宁栋;李佳倩 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-11-23 - 公布日： 2021-02-19 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，包括培养基的制备；抗生素平板的配制；菌株的获取；菌株的活化接种；纤维素酶活性菌株的筛选；筛选菌株判定；菌株纤维素酶活性的初步判定。该方法可以简单快速的筛选到具有纤维素酶活性的破囊壶菌，具有操作简单，耗时短，效率高的有点。除了可用于识别产纤维素酶的菌株外,它还可用于初步判定酶活性的高低。菌株产酶越多，出现的透明圈越大，菌株产酶越快,透明圈出现越早。因此，可以根据透明水解圈的大小、透明圈出现的早迟可粗略估计菌株产酶情况。
一种筛选具有纤维素酶活性破囊壶菌方法

[发明专利]一种近海海域中抗性基因intl1的检测方法-CN202011317374.8在审
发明人： 汪光义;郭嘉懿;何艺科;李佳倩 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-11-23 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开一种近海海域中抗性基因intl1的检测方法，包括环境样品中DNA的提取；目的片段的扩增；标准质粒模板的构建；DNA片段经纯化后与PGM‑18载体进行恒温连接，连接结束后，取5ul连接产物，加入置于含有50ul感受态细胞(H5α)的1.5ml的离心管中，混匀后，冰浴30min；在42℃下热击60s，再冰浴2min。加入800ul LB液体培养基，37℃，170rpm下振荡培养1h；用质粒小提试剂盒按照商家提供的说明书进行质粒的提取，提取后送公司测序；建立Q‑PCR定量标准曲线；环境样品抗性基因intl1的测定，按照定量标准曲线将Ct值转换成拷贝数，从而定量环境样品中intl1基因的浓度。
一种近海海域抗性基因 intl1 检测方法

[发明专利]一种定量测定破囊壶菌纤维素酶活性的方法-CN202011317393.0在审
发明人： 汪光义;刘媛媛;谢宁栋;李佳倩 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-11-23 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明公开一种定量测定破囊壶菌纤维素酶活性的方法，包括培养基的制备、试剂的配制、种子液的制备、麸皮发酵培养基的接种、还原糖标准曲线的绘制、纤维素酶活性的测定、菌株纤维素酶活性曲线的绘制，根据计算得出的纤维素酶活性，绘制纤维素酶活性随时间的变化曲线。使用相对廉价的试剂对破囊壶菌的纤维素酶活性做出定量。该方法使用的麸皮液体发酵培养基，添加的氮源为无机氮源，避免了使用有机氮源带来的干扰，使菌株可以利用麸皮作为唯一碳源进行生长和产酶。
一种定量测定破囊壶菌纤维素酶活性方法

[发明专利]一种近海海域中抗性基因tetG的检测方法-CN202011317324.X在审
发明人： 汪光义;郭嘉懿;李佳倩;何艺科 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-11-23 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开一种近海海域中抗性基因tetG的检测方法，包括环境样品总DNA的提取；目的片段的扩增；标准质粒模板的构建；建立Q‑PCR定量标准曲线；环境样品抗性基因tetG的测定。与当下基于选择性培养检测方法相比，该方法有以下优点：首先，缩短了检测时间，由原方法的3‑4天，缩短为1天，在完成标准曲线的情况下仅需2‑3个小时。其次，克服了原方法无法测定不可培养微生物所携带的抗性基因tetG的问题，提高了鉴别的准确度。
一种近海海域抗性基因 tetg 检测方法

[发明专利]基于限氮培养和植物激素调控的破囊壶菌脂肪酸生产方法-CN202010666085.2在审
发明人： 汪光义;阿穆里·布赫拉;谢宁栋;张赛;梅蒙·卡希夫·阿里 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-07-12 - 公布日： 2020-09-29 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了基于限氮培养和植物激素调控的破囊壶菌脂肪酸生产方法，该方法包括：(1)配制限氮培养基；(2)加入植物激素；(3)将破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW8 CGMCC No.20069接种到步骤(2)获得的培养基中，培养，离心、水洗、冻干收获生物质，提取脂肪酸。本发明的方法提升破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW8 CGMCC No.20069的脂肪酸生产效率。本发明的方法具有简单、易操作、低成本等特点，相比于标准的培养条件，改进后的培养条件对脂肪酸特别是多不饱和脂肪酸产量的提升具有明显的效果。
基于培养植物激素调控破囊壶菌脂肪酸生产方法

[发明专利]一种高产脂肪酸的制备方法及破囊壶菌培养基-CN201911192842.0在审
发明人： 汪光义;温帅;叶会科;谢云轩;何耀东 -专利权人：天津大学;中国大洋矿产资源研究开发协会
申请日： 2019-11-28 - 公布日： 2020-09-11 - 主分类号： C12P7/64 文献下载
摘要：本发明公开一种高产脂肪酸的破囊壶菌培养基，成分及比例如下所示：Glycerol 35‑65g/l，Peptone 2‑8g/l，磷酸二氢钾0.2‑1g/l，海盐25‑35g/l。还公开高产脂肪酸的制备方法，主要步骤包括：液体培养基MPqd的制备；破囊壶菌液体培养基MP的制备；破囊壶菌固体培养基MP的制备；活化；破囊壶菌种子液的制备；破囊壶菌发酵培养基的制备；最后破囊壶菌生物量的测定和脂肪酸的测定。本发明培养基配方简单，能源利用高，绿色无污染，降低成本，提高脂肪酸的产量，利于工业化生产。
一种高产脂肪酸制备方法破囊壶菌培养基

[发明专利]高效液相色谱法检测破囊壶菌中角鲨烯的方法-CN201811316768.4在审
发明人： 汪光义;汪伟骏;张爱卿;刘璐;叶会科 -专利权人：天津大学
申请日： 2018-11-07 - 公布日： 2020-05-15 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开了高效液相色谱法检测破囊壶菌中角鲨烯的方法，包括如下步骤：(1)角鲨烯标准曲线的建立；(2)从破囊壶菌发酵液中提取角鲨烯：将破囊壶菌放入M4培养基中发酵培养，菌液离心，去上清，灭菌水洗，冻干，冻干菌体加入氯仿的甲醇溶液，匀质机破碎，氮吹干，加入NaOH溶液，涡旋，60℃水浴；取出，冷却至室温，加入正己烷萃取，上层萃取液为角鲨烯粗提待测样品；(3)使用高效液相色谱对所述角鲨烯粗提待测样品进行检测，得到峰面积，代入回归方程，得到角鲨烯含量；本发明样品的分析时间短，角鲨烯峰与其他杂质峰得到很好分离，出峰时间早，检测效率高，且灵敏度高，准确性好，是一种简便、快速、准确、环保的检测方法。
高效色谱检测破囊壶菌中角鲨烯方法

[发明专利]一种耐盐弗氏柠檬酸杆菌的筛选培养基及培养方法-CN201811273540.1在审
发明人： 汪光义;王雅琼;何耀东 -专利权人：天津大学青岛海洋技术研究院
申请日： 2018-10-30 - 公布日： 2020-05-08 - 主分类号： C12Q1/04 文献下载
摘要：一种耐盐弗氏柠檬酸杆菌的筛选培养基及培养方法，步骤主要包括高盐淀粉—酪素琼脂培养基的制备，盐湖水接种，培养箱培养，单克隆接种，形态观察及16S测序；本发明提供的筛选培养基及培养条件简单，操作方便，可作为筛选耐盐微生物通用方法。
一种耐盐弗氏柠檬酸杆菌筛选培养基培养方法

[发明专利]一种高产二十二碳六烯酸破囊壶菌菌株的育种方法-CN201811209492.X在审
发明人： 汪光义;姚力芬;汪伟骏;叶会科 -专利权人：天津大学
申请日： 2018-10-17 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产二十二碳六烯酸破囊壶菌菌株的育种方法，包括如下步骤：制备破囊壶菌菌悬液；(2)在黑暗环境中，选择紫外光，取菌悬液均匀平铺在培养皿底部，加入灭菌后的磁子，搅拌，紫外照射，将紫外照射后的菌液再用无菌生理盐水稀释，均匀涂布在新鲜的M4平板培养基上，用锡箔纸包住，避光培养；(3)观察M4平板培养基上菌落大小及长势情况，挑选出形态大，表面光滑的单菌落为初筛，将初筛获得的单菌落发酵培养，检测其生物量及DHA产量，筛选出能够稳定遗传的高产二十二碳六烯酸的破囊壶菌菌株。本发明的方法操作简单，成本低，且时间短。经过本发明的方法获得的菌株，较野生株DHA产量提高最多可达32％，经济效益显著。
一种高产十二碳六烯酸破囊壶菌菌株育种方法

[发明专利]一种破囊壶菌高产DHA的单一葡萄糖碳源流加发酵培养基及其流加培养方法-CN201811163491.6在审
发明人： 汪光义;姚力芬;叶会科;张赛 -专利权人：天津大学青岛海洋技术研究院
申请日： 2018-09-30 - 公布日： 2020-04-07 - 主分类号： C12P7/64 文献下载
摘要：一种破囊壶菌高产DHA的单一葡萄糖碳源流加发酵培养基及其流加方法，培养方法主要包括破囊壶菌发酵培养基制备和流加葡萄糖的制备，菌种活化，种子液制备，发酵罐发酵培养，生物量干重、总油脂以及DHA产量的测定。本发明提供的发酵培养基及流加方法简单、方便操作，生产成本低，DHA产量高，有利于进一步放大生产，直至工业化生产，社会及经济效益巨大。
一种破囊壶菌高产 dha 单一葡萄糖碳源发酵培养基及其培养方法

[发明专利]近海水域中肠球菌的快速检测方法-CN201910644095.3在审
发明人： 汪光义;王国柱;靳蕊;郑利涛 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-07-17 - 公布日： 2020-02-07 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开一种近海水域中肠球菌的快速检测方法,主要步骤为:首先，监测海域水环境细菌总DNA的获取；其次目的片段的获取；构建标准质粒和建立Q‑PCR定量标准曲线；最后采用Q‑PCR技术测定肠球菌丰度。本发明缩短了检测时间且克服了原方法无法测定不可培养肠球菌的问题，提高了鉴别的准确度。
肠球菌定量标准曲线准确度标准质粒近海水域快速检测目的片段水环境总DNA 丰度构建细菌海域监测检测

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