本发明公开了抗菌肽defensin衍生物及其原核表达方法与应用。本发明通过RACE PCR的方法从大麦虫扩增出抗菌肽defensin基因编码区,通过原核表达获得了具有良好抗菌活性的重组大麦虫defensin,实现了抗菌肽defensin体外表达。然后利用生物合成技术制备了大麦虫defensin衍生物,序列如SEQ ID NO:3~8所示。试验证实重组defensin及其衍生物ZM‑d14CFR对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有良好的抗菌活性,且无细胞毒性和溶血性,是理想的抗菌物质,应用前景广阔。