本发明公开了一种鉴别蛇皮果性别的DNA片段、引物和方法。鉴定蛇皮果性别的DNA特异性片段,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。鉴别引物如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。鉴定方法是用鉴别引物作为扩增引物,以样品的基因组DNA作为模板进行PCR反应,将PCR产物进行电泳检测,电泳结果中出现一段1579bp条带的样品为雄株,而相同部位没有出现条带的样品为雌株。本发明的引物和鉴定方法能够准确的鉴别出蛇皮果的雌雄性别,相比于传统的肉眼鉴定蛇皮果植株性别,本发明具有简单,方便,随时都可以鉴定的优点,为更有效、合理的种植蛇皮果创造了条件。