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[发明专利]二联定性真菌毒素胶体金免疫层析试纸条及制备方法-CN201611155049.X在审
发明人：章先;程昌勇;王晓杜;李肖梁;方维焕;宋厚辉 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2016-12-14 - 公布日： 2017-05-17 - 主分类号： G01N33/558 文献下载
摘要：本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种二联定性真菌毒素胶体金免疫层析试纸条及制备方法。包括作为基材的黑色长条状聚氯乙烯背板；在沿背板长度方向在其表面依次布置样品垫、胶体金抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，相邻垫或膜间彼此搭接；在硝酸纤维素膜上，设有与背板同宽的彼此间隔的两条检测线和一条质控线，其中质控线位于两条检测线之间。本发明以采用成本较低的胶体金作为抗体标记物，采用竞争法原理对真菌毒素进行快速检测，硝酸纤维素膜同时包被两条检测线，通过肉眼比较显色的深浅，可同时对两种真菌毒素进行快速定性检测。所制备的层析试纸条具有良好的灵敏度和稳定性且操作简便快捷，成本低，特别适用于现场的快速诊断。
二联定性真菌毒素胶体免疫层析试纸制备方法

[发明专利]猪附红细胞体、小附红细胞体和未定种附红细胞体检测用引物及试剂盒-CN201410253400.3有效
发明人：付媛;石团员;方维焕;徐丽华;袁秀芳;李军星;卢福庄;张雪娟;舒琦艳;魏巍;周永学 -专利权人：浙江省农业科学院
申请日： 2014-06-09 - 公布日： 2017-01-18 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了猪附红细胞体、小附红细胞体和未定种附红细胞体检测用引物和检测试剂盒。所述检测用引物为序列表SEQ ID NO1至SEQ ID NO4，本发明还提供了猪附红细胞体、小附红细胞体和未定种附红细胞体的检测试剂盒。本发明所选引物特异性强，且能同时检测三种病原，节约成本、减少步骤，提高效率。本发明方法具有高特异性、高灵敏度，高效率、稳定性好的特点。
猪附红细胞体小附红未定种附红检测引物试剂盒

[发明专利]一种空肠弯曲菌快速定量检测试剂盒及使用方法-CN201610528308.2在审
发明人：李肖梁;方维焕;刘玺;潘航 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-07-05 - 公布日： 2016-10-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及生物检测技术，旨在提供一种空肠弯曲菌快速定量检测试剂盒。该试剂盒包括多个冻存管，其中冻存管A装有冻干粉，其成分包括探针法荧光定量PCR预混液试剂，以及用于荧光定量检测的两条引物和一条探针；5个冻存管B分别装有无菌双蒸水；5个冻存管C分别装有TZ裂解液；冻存管D～J共7个，分别装有不同浓度的空肠弯曲菌标准品DNA冻干粉，空肠弯曲菌浓度按十倍递减。本发明空肠弯曲菌快速定量检测试剂盒是基于对空肠弯曲菌mapA基因设计引物探针以及检测条件的优化而实现的。空肠弯曲菌快速定量检测方法可在短时间内检测并定量样品中的空肠弯曲菌数量，最低检测下限可达102CFU/mL，具有很好的特异性、灵敏性和准确性，方便快捷易操作。
一种空肠弯曲快速定量检测试剂盒使用方法

[发明专利]生物素链霉亲和素与电化学联用检测霉菌毒素的方法-CN201510400407.8在审
发明人： 方维焕;章先;李肖梁;王歆;孙孟娇;谢珲 -专利权人：浙江大学
申请日： 2015-07-06 - 公布日： 2015-12-16 - 主分类号： G01N33/535 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程领域，旨在提供一种生物素链霉亲和素与电化学联用检测霉菌毒素的方法。该方法是在常规间接竞争ELISA反应的基础上，选用生物素标记的霉菌毒素单克隆抗体，并用碱性磷酸酶标记的链霉亲和素代替传统的酶标抗体，借助生物素链霉亲和素信号放大系统提高检测的灵敏度；并选用硝基苯磷酸作为碱性磷酸酶的催化底物，利用其产物硝基苯酚具有与硝基苯磷酸不同的电化学性质，通过电化学方法采集反应的最终信号；数据处理时，根据标准曲线计算实际样本中待检霉菌毒素的含量。本发明对待检测物质的检测灵敏度可以达到皮克-纳克水平；本发明成本低，易获取，并可实现高通量检测。具有简单，经济，高灵敏度，易操作，痕量检测等优点。
生物素亲和电化学联用检测霉菌毒素方法

[发明专利]双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法-CN201510359684.9在审
发明人： 方维焕;章先;李肖梁;谢珲;王歆;孙孟娇 -专利权人：浙江大学
申请日： 2015-06-25 - 公布日： 2015-11-11 - 主分类号： G01N33/58 文献下载
摘要：本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法。该试纸条在聚氯乙烯背板表面依次布置样品垫、量子点抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有两条检测线和一条质控线；在固定垫上固定有真菌毒素单克隆抗体与羧基水溶性量子点的标记复合物；质控线由山羊抗鼠多克隆抗体喷涂形成，检测线由待检真菌毒素偶联抗原喷涂形成，两条检测线所含真菌毒素偶联抗原是不同的。本发明采用竞争法原理对真菌毒素进行定性检测和定量分析，可同时对两种真菌毒素进行检测，所制备的层析试纸条具有良好的灵敏度和稳定性，且操作简便快捷，特别适用于现场的快速诊断。
双重定量真菌毒素量子荧光免疫层析试纸制备方法

[发明专利]量子点阳离子交换信号放大技术检测真菌毒素的方法-CN201510366461.5在审
发明人： 方维焕;章先;李肖梁;谢珲;王歆;孙孟娇 -专利权人：浙江大学
申请日： 2015-06-25 - 公布日： 2015-10-21 - 主分类号： G01N33/58 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，旨在提供一种量子点阳离子交换信号放大技术检测真菌毒素的方法。该方法是利用羧基修饰的水溶性硒化镉/硫化锌量子点对真菌毒素单克隆抗体进行标记，使量子点上的羧基与抗体氨基在偶联剂的作用下形成稳定的形成量子点标记的真菌毒素单克隆抗体；然后以竞争ELISA模式对真菌毒素进行检测，并采用阳离子交换信号放大技术，最终对反应后的荧光信号进行分析，实现真菌毒素的快速定性检测和定量分析。本发明在提高检测灵敏度和稳定性的同时，缩短了检测的时间，检测真菌毒素时仅需45min。对待检的真菌毒素的检测灵敏度可以达到皮克水平；本发明中使用的量子点合成方便，成本低。具有高效、快捷、灵敏度高、检测信号稳定等优点。
量子阳离子交换信号放大技术检测真菌毒素方法

[发明专利]量子点阳离子交换信号放大技术检测蛋白类毒素的方法-CN201510364429.3在审
发明人： 方维焕;章先;李肖梁;王歆;谢珲;时玉菲;孙孟娇 -专利权人：浙江大学
申请日： 2015-06-25 - 公布日： 2015-09-16 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，旨在提供一种量子点阳离子交换信号放大技术检测蛋白类毒素的方法。该方法是利用羧基修饰的水溶性硒化镉/硫化锌量子点对蛋白类毒素多克隆抗体进行标记，使量子点上的羧基与抗体氨基在偶联剂的作用下形成稳定的形成量子点-多克隆抗体偶联物；然后以夹心ELISA模式对蛋白类毒素进行检测，采用阳离子交换信号放大技术对结果进行分析，实现蛋白类毒素的定性检测和定量分析。本发明在提高检测灵敏度和稳定性的同时，缩短了检测的时间；对待检的蛋白类毒素的检测灵敏度可以达到皮克水平；本发明中使用的量子点合成方便，成本低。具有高效、快捷、灵敏度高、检测信号稳定等优点。
量子阳离子交换信号放大技术检测蛋白类毒素方法

[发明专利]双重定量蛋白毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法-CN201510364747.X在审
发明人： 方维焕;章先;李肖梁;王歆;谢珲;时玉菲;孙孟娇 -专利权人：浙江大学
申请日： 2015-06-25 - 公布日： 2015-09-09 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种双重定量蛋白毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法。该试纸条在聚氯乙烯背板表面依次布置样品垫、量子点抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有两条检测线和一条质控线；在固定垫上固定有蛋白类毒素特异性单克隆抗体与羧基修饰水溶性量子点标记复合物；质控线由山羊抗鼠多克隆抗体喷涂形成，检测线由待检蛋白类毒素多克隆抗体喷涂形成，两条检测线所含蛋白类毒素多克隆抗体是不同的。本发明采用夹心法原理对蛋白类毒素进行定性检测和定量分析，可同时对两种蛋白类毒素进行定量检测，所制备的层析试纸条具有良好的灵敏度和稳定性，且操作简便快捷，特别适用于现场的快速诊断。
双重定量蛋白毒素量子荧光免疫层析试纸制备方法

[发明专利]基于非标记荧光染料和核酸适配体的检测生物分子的方法-CN201410684970.8在审
发明人：宋厚辉;金庆日;杨梦华;邵春艳;程昌勇;王晓杜;杨杨;杨永春;卫芳芳;桂海娈;张亚军;方维焕 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2014-11-25 - 公布日： 2015-03-25 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程领域，旨在提供一种基于非标记荧光染料和核酸适配体的检测生物分子的方法。该方法是将核酸适配体和待检测的生物分子混合后，加入与核酸适配体互补的寡核酸链；核酸适配体与待检测的生物分子发生特异性结合，未结合的多余核酸适配体则与互补的寡核酸链杂交生成双链DNA，而双链DNA与非标记荧光染料PicoGreen结合释放荧光；不同浓度的待检测的生物分子与固定浓度的核酸适配体结合时反应液中的荧光强度不同，通过检测荧光强度就能实现对生物分子快速、定量的检测。本发明在提高检测灵敏度和特异性的同时，缩短了检测的时间，仅需25-40分钟；对待检测物质的检测灵敏度可以达到皮克-纳克水平；本发明中使用的核酸适配体可以方便合成，成本低。
基于标记荧光染料核酸适配体检测生物分子方法

[发明专利]抗中华鳖IL-1β多克隆抗体的制备及在检测中的应用-CN201210571022.4无效
发明人：李肖梁;方维焕;梁权 -专利权人：浙江大学
申请日： 2012-12-24 - 公布日： 2013-04-24 - 主分类号： C07K16/24 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种抗中华鳖IL-1β多克隆抗体的制备及在检测中的应用。该方法包括步骤：抗原(tIL-1β)制备、动物免疫和多克隆抗体纯化。本发明以重组tIL-1β蛋白为抗原免疫实验兔获得了特异性的抗tIL-1β多克隆抗体，制备的特异性抗tIL-1β抗体可用于tIL-1β间接免疫荧光(IFA)和western-blotting检测。结果为通过免疫学方法和手段进行中华鳖的病害控制提供基础。
中华 il 克隆抗体制备检测中的应用

[实用新型]一种用于指示环境温度变化的视觉标签-CN201220426104.5有效
发明人：李肖梁;方维焕;宋厚辉 -专利权人：浙江大学
申请日： 2012-08-24 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： G09F3/02 文献下载
摘要：本实用新型涉及标签材料领域，旨在提供一种用于指示环境温度变化的视觉标签。该标签至少包括依次设置的三层结构：滤纸A、塑隔层和滤纸B，且塑隔层能够从滤纸A和滤纸B之间抽离；其中，滤纸A上含有均匀混合的高分子聚合材料H-[OCH2-CH2-]n-OH及颜料，用于指示环境温度变化；所述颜料为食品着色剂或化工染料。本实用新型的温敏标签适用于食品冷链物流、生物制品冷链物流、冷库、冷藏车、超市冷柜、高温电缆、变电站、极地等对温度有特殊要求的环境。相对于现有的温度标识技术，本实用新型具有简捷、快速、使用方便、适用广、成本低廉等优点。
一种用于指示环境温度变化视觉标签

[实用新型]一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置-CN201220252579.7有效
发明人：宋厚辉;方维焕;金佩华;武晓林;黄丽;桂海娈 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2012-05-28 - 公布日： 2013-02-27 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本实用新型涉及生物工程领域，旨在提供一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置。该装置的主体结构是一张印刷电路板，印刷电路板上布设若干个完全相同的紫外发光二极管，各二极管和辅助电子元件通过印刷电路板实现连接；每个二极管的发射波长为395～415 nm，波峰为405 nm，正向导通电压为3.5V，功率为10～40 mW，辐射角度为30度，直径小于6 mm。本实用新型可以直接用于96孔细胞培养板或者圆形平皿中细菌的光激发，仅需要1 min光激发时间，即可通过普通的荧光显微镜对培养板或者平板上的细菌是否具有光敏特性进行判定。该装置适用于表达光敏蛋白的所有微生物，只要光敏蛋白对405 nm紫外光敏感均可以使用；具有高效、简捷、快速、方便、适用广等特点。
一种用于激活微生物体内光敏蛋白装置

[发明专利]一种用于指示环境温度变化的视觉标签-CN201210306405.9有效
发明人：李肖梁;方维焕;宋厚辉 -专利权人：浙江大学
申请日： 2012-08-24 - 公布日： 2012-11-21 - 主分类号： G09F3/02 文献下载
摘要：本发明涉及标签材料领域，旨在提供一种用于指示环境温度变化的视觉标签。该标签至少包括依次设置的三层结构：滤纸A、塑隔层和滤纸B，且塑隔层能够从滤纸A和滤纸B之间抽离；其中，滤纸A上含有均匀混合的高分子聚合材料H-[OCH2-CH2-]n-OH及颜料，用于指示环境温度变化；所述颜料为食品着色剂或化工染料。本发明的温敏标签适用于食品冷链物流、生物制品冷链物流、冷库、冷藏车、超市冷柜、高温电缆、变电站、极地等对温度有特殊要求的环境。相对于现有的温度标识技术，本发明具有简捷、快速、使用方便、适用广、成本低廉等优点。
一种用于指示环境温度变化视觉标签

[发明专利]一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置及应用-CN201210173882.2有效
发明人：宋厚辉;方维焕;金佩华;武晓林;黄丽;桂海娈 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2012-05-28 - 公布日： 2012-09-26 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程领域，旨在提供一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置及应用。该装置的主体结构是一张印刷电路板，印刷电路板上布设若干个完全相同的紫外发光二极管，各二极管和辅助电子元件通过印刷电路板实现连接；每个二极管的发射波长为395～415nm，波峰为405nm，正向导通电压为3.5V，功率为10～40mW，辐射角度为30度，直径小于6mm。本发明可以直接用于96孔细胞培养板或者圆形平皿中细菌的光激发，仅需要1min光激发时间，即可通过普通的荧光显微镜对培养板或者平板上的细菌是否具有光敏特性进行判定。该装置适用于表达光敏蛋白的所有微生物，只要光敏蛋白对405 nm紫外光敏感，均可以使用该装置；具有高效、简捷、快速、方便、适用广等特点。
一种用于激活微生物体内光敏蛋白装置应用

[实用新型]一种用于肉制品非热灭菌的在线式高压脉冲电场处理室-CN201120390761.4有效
发明人：王剑平;黄康;余琳;盖玲;方维焕 -专利权人：浙江大学
申请日： 2011-10-14 - 公布日： 2012-06-20 - 主分类号： A23B4/015 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于肉制品非热灭菌的在线式高压脉冲电场处理室。在上机架下端面安装气缸，二根导向杆的一端分别垂直安装在气缸两侧的上机架下端面上，机械臂两端与导向杆构成滑动配合，机械臂上装有上部处理室，上部处理室与气缸的活塞杆连接，上机架上装有控制器；下机架下端面安装链传动马达，马达两侧的下机架下端面分别安装两个为一组的从动链轮，链传动马达驱动两组传动链条经从动链轮循环转动，下机架的两侧对称安置一对光电传感器，传动链条两侧等距装有多个下部处理室。本实用新型保证处理腔体内电场分布的均匀性；采用的循环冷却结构，降低了电极的温度，减少肉制品在处理过程中的温度升高，保证灭菌过程的连续工作，提高生产效率。
一种用于肉制品灭菌在线高压脉冲电场处理