本发明涉及一种微生物种群绝对丰度定量的内参组合物、试剂盒及方法，内参组合物包括SEQ ID No.1‑SEQ ID No.8所示的8条内参序列，SEQ ID No.1‑SEQ ID No.8具有由低到高的浓度梯度，且内参组合物与样本的占比为10%‑30%。通过向环境样本中添加不同浓度梯度的内参DNA，量化不同微生物群落间的绝对含量，在PCR反应过程中，内参DNA分子产生预期大小的扩增子，结合内参DNA的拷贝数和测序输出的reads数，建立内参DNA拷贝数和reads间的标准曲线，进一步可计算出样本中各菌群拷贝数的绝对丰度，可以准确估算单位样品中物种的绝对丰度。本方法一次扩增实验，可以同时得到相对定量和绝对定量结果两份分析结果，节省样品与内参DNA用量，最大程度上节省测序成本。
