本发明公开了一种黄牛亲权鉴定和个体识别的复合扩增试剂盒及应用,试剂盒包括扩增20个黄牛STR位点和1个Amel性别位点的21对特异性引物,特异性引物的序列如序列表中SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:42所示,可同时扩增20个黄牛STR位点和1个Amel性别位点。本发明提供的黄牛亲权鉴定和个体识别的复合扩增试剂盒及应用,试剂盒同时包括常染色体STR、Y染色体STR与Amel性别位点,为同类型产品中检测位点最多的试剂盒,可在单管中同时扩增、检测20个黄牛STR位点及1个黄牛性别位点,具有特异性强、分辨率高、分型准确、灵敏度高等特点,可完全满足黄牛亲权鉴定、个体识别、性别辨别等多方面需求。