本发明属于检验检疫技术领域,具体涉及一种非洲马瘟病毒RNA定性标准样品,还涉及上述标准样品的应用、制备工艺。非洲马瘟病毒RNA定性标准样品,其特征在于,所述的标准样品的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。核酸序列编码非洲马瘟病毒核蛋白VP7。本发明还要保护的是,非洲马瘟病毒RNA定性标准样品在制备非洲马瘟核酸检测试剂盒中的应用。本发明针对于检测非洲马瘟病毒实时荧光RT‑PCR提供了一种无生物传染性的核酸标准样品,便于实现对非洲马瘟病毒的检测;采用本发明的方法获得的标准样品,均匀性好,且该标准样品的特性量值模拟运输条件37℃、42℃条件的测定值具有一致性,没有发生显著性变化,性质是稳定的。