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[发明专利]一种快速鉴定大肠埃希菌与泛菌的方法-CN202111231370.2在审
发明人：赵云冬;王丹;赵潇颖;贾慧建;宋顺佳;姜菲菲;邵学超;赵远 -专利权人：北华大学
申请日： 2021-10-22 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术快速鉴定大肠埃希菌和泛菌DNA的试剂盒。其特点是，它包含：PCR反应体系和酶切反应体系。PCR反应体系：总体系为25μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，待检DNA模板(10ng/μL)1μL，引物F、R(2.5ng/μL)各0.4μL，余为双蒸馏水。酶切反应体系：总体系20μL，取上述PCR产物10μL于EP管中，加入Hind III酶1μL，10×M Buffer 2μL，余为双蒸馏水。本发明是基于细菌16S rDNA基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对大肠埃希菌和泛菌16S rDNA基因片段进行分析，发现二者具有较高的同源性，普通PCR难以鉴别。在大肠埃希菌在16S rDNA基因片段中存在一个酶切位点，而泛菌不存在此位点，据此建立PCR‑酶切技术，对大肠埃希菌进行快速、可靠的鉴定。
一种快速鉴定大肠埃希菌方法

[发明专利]呼吸道感染常见革兰阳性菌复合乳胶快速鉴定试剂盒及鉴定方法-CN202111568555.2在审
发明人：孙丽媛;姜菲菲;宋顺佳;赵远;贾慧建;王丹;赵潇颖;王岳峰;邵学超 -专利权人：北华大学
申请日： 2021-12-21 - 公布日： 2023-01-24 - 主分类号： C12Q1/14 文献下载
摘要：本发明涉及微生物检测技术领域，是呼吸道常见革兰阳性菌复合乳胶凝集鉴定试剂盒，其特征是由样本处理液、阳性对照品、阴性对照品、乳胶检测试剂四部分组成，包括：复合乳胶检测试剂1管，3mL/管；阳性对照样本1管，0.6mL/管；阴性对照样本1管，0.6mL/管；样本处理液1管，0.6mL/管。呼吸道常见革兰阳性菌鉴定方法是设计三种不同颜色乳胶凝集颗粒，确定最佳包被比例、包被条件和结果判定等步骤。检测样本出现乳胶凝集现象时，即判为阳性结果：蓝色凝集代表金黄色葡萄球菌阳性，红色凝集代表肺炎链球菌阳性，白色凝集代表乙型溶血性链球菌阳性；根据相应凝集颜色判定是单独一种或两种、甚至三种混合阳性。不出现凝集则判为阴性。鉴定方法能够直接准确鉴定且区分是金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌感染。
呼吸道感染常见阳性复合乳胶快速鉴定试剂盒方法

[发明专利]一种快速鉴定真菌核酸胶体金试纸条的方法-CN202111568260.5在审
发明人：孙丽媛;姜菲菲;王岳峰;赵潇颖;王丹;宋顺佳;于晟曼;孙丽颖 -专利权人：北华大学
申请日： 2021-12-21 - 公布日： 2023-01-24 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学技术和免疫学技术在微生物鉴定领域的应用，是一种基于分子生物学技术联合免疫学技术快速鉴定呼吸道感染真菌的胶体金免疫层析试纸条。基于真菌ITS基因片段具有高度的保守性，使用DNAMAN对真菌ITS基因片段进行分析，利用NCBI primer‑BLAST 5.0引物设计软件，设计真菌特异性引物。在真菌特异性引物ITS1 5'用FITC进行标记，ITS4 5'用Biotin进行标记，将扩增产物滴加在胶体金试纸条加样处，PCR扩增后产物一端修饰的生物素首先与金标垫上修饰有链霉素抗生物素蛋白的胶体金结合，检测线上的抗荧光素抗体将一端修饰有荧光素的扩增产物捕获，产生红色的条带；质控线上的生物素捕获胶体金，使质控线同样显色。在保证质控线为阳性的提前下，通过检测线是否出现颜色反应确定是否真菌感染，据此建立PCR‑胶体金免疫层析试纸条技术，对呼吸道感染真菌进行快速、可靠的鉴定。
一种快速鉴定真菌核酸胶体试纸方法