本发明公开了一种适用于谷氨酸棒状杆菌的cumate诱导系统及该诱导系统构建的质粒载体和应用。该系统包括：阻遏蛋白CymR基因、启动子、操纵基因CuO及强启动子；启动子控制阻遏蛋白CymR基因，强启动子控制操纵基因CuO。所述阻遏蛋白CymR基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述操纵基因CuO的如SEQ ID NO:2所示。本发明提供的质粒载体包含上述cumate诱导系统。本发明构建的诱导系统严格受诱导剂cumate(四‑异丙基苯甲酸)的调控，实现了cumate对目的基因表达的调控，并且可通过诱导剂cumate的浓度及诱导时间对目的蛋白的表达量进行控制。
本发明公开了产肠毒素B(SEB)金黄色葡萄球菌的CPA检测引物及其检测试剂盒和方法。该CPA引物包括剥离引物4s、5a，交叉扩增引物2a1s，以及特异引物2a、3a；其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。本发明中所提供的针对金黄色葡萄球菌肠毒素B基因序列所设计的交叉引物恒温扩增反应检测鉴定体系，解决现有技术方法所需周期长，灵敏度低，成本高，现场应用困难等缺陷。通过选择目标菌株的肠毒素B基因序列的保守区域，设计一对剥离引物、交叉引物和特异引物构建交叉引物恒温扩增反应体系，并在60分钟左右获得检测结果以缩短传统检测产肠毒素B金黄色葡萄球菌的周期。
本发明公开了单增李斯特菌的CPA引物、检测试剂盒和检测方法，该引物包括剥离引物4s、5a，交叉扩增引物2a1s，以及特异引物2a、3a；其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑NO.5所示。本发明针对单增李斯特菌特异性靶序列hlyA所设计的交叉引物恒温扩增反应检测鉴定体系，解决了现有的检测技术方法耗时长，灵敏度低，成本高，现场应用困难等缺陷。通过选择目标菌株的特异性序列hlyA的保守区域，设计一对剥离引物、交叉引物和特异引物构建交叉引物恒温扩增反应体系，并在60分钟左右获得检测结果以缩短传统单增李斯特菌检测的周期。
本发明公开了一种检测肠毒素SEA的PSR引物、检测试剂盒和检测方法，所述引物包括检测引物Ft和检测引物Bt，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明针对肠毒素SEA设计的PSR检测引物和方法解决了现有技术方法所需周期长，灵敏度低，成本高，现场应用困难等问题。通过选择目标菌株的SEA肠毒素特异性序列的保守区域，设计一对检测引物Ft和Bt构建PSR反应体系，并在60分钟左右获得检测结果，较传统MRSA肠毒素的检测方法大大缩短了检测周期。
本发明公开了一种杀白细胞毒素阳性金黄色葡萄球菌的CPA引物及其检测试剂盒和检测方法，针对靶点pvl设计的CPA引物包括剥离引物4s、5a，交叉扩增引物2a1s，以及特异引物2a、3a；其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。本发明针对金葡杀白细胞毒素特异性靶序列pvl设计了一对剥离引物、交叉引物和特异引物，构建了交叉引物恒温扩增反应体系，60分钟左右就能实现对携带杀白细胞毒素基因pvl金葡菌的检测，并且检测限达到pg/μL的级别，克服了现有检测技术周期长、灵敏度低、成本高、现场应用困难等缺陷。
本发明公开了一种沙门氏菌的CPA检测引物及检测试剂盒和检测方法，该针对靶点invA设计的CPA引物包括剥离引物4s、5a，交叉扩增引物2a1s，以及特异引物2a、3a；其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。本发明中所提供的针对沙门氏菌特异性靶序列invA所设计的交叉引物恒温扩增反应检测鉴定体系，解决了现有技术方法所需周期长，灵敏度低，成本高，现场应用困难等缺陷。通过选择目标菌株的特异性序列invA的保守区域，设计一对剥离引物、交叉引物和特异引物构建交叉引物恒温扩增反应体系，可在60分钟左右获得检测结果以缩短传统沙门氏菌检测的周期。
本发明公开了一种交叉引物恒温技术检测MRSA肠毒素的引物、试剂盒及方法。本发明针对MRSA肠毒素SEA设计的CPA引物包括剥离引物4s、5a，交叉扩增引物2a1s以及特异引物2a、3a；其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ IDNO.5所示。构建的交叉引物恒温扩增体系可以通过反应体系的荧光染料显色实现1小时左右判断fg/μL级肠毒素SEA的存在，解决了现有技术方法所需周期长、灵敏度低、成本高、现场应用困难等缺陷。
本发明公开了一种巨大芽孢杆菌具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。本发明的DNA片段具有启动子的功能，同时具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，可将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达分泌系统提供了有效的元件。
本发明公开了一种可用于提高分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明提供了一种具有很强的分泌表达活性的信号肽，能实现外源基因的高表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件。
