本发明公开一种快速鉴别胎儿弯曲菌和性病亚种的方法和试剂盒。该方法通过以待检样品的基因组DNA为模板,在qPCR反应体系中还加入如SEQ ID NO.1、2、4和5所示的引物和如SEQ ID NO.3和6所示的探针进行双重实时荧光定量PCR,Ct值<35为阳性;35~40为可疑,需要重复试验一次;>40为阴性。实现该方法的试剂盒主要包括上述引物和探针。本发明具有如下优点:能极大地缩短检测时间,只需要1天时间即可完成整个检测;操作更加简单,只需要提取核酸和荧光PCR,无需额外操作;一次性能对待检样品进行胎儿弯曲菌和性病亚种的定性和定量检测;灵敏度高,结果准确可靠。