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[发明专利]一株可高效表达外源分泌蛋白的枯草芽孢杆菌-CN201310100812.9有效
发明人：范岩;陆亚敏;杜秀贞;杜华东;付奇;乔宾福 -专利权人：南京百斯杰生物工程有限公司
申请日： 2013-03-26 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株可高效表达外源分泌蛋白酶的枯草芽孢杆菌。一个表达外源蛋白的枯草芽孢杆菌宿主菌，该表达外源蛋白的枯草芽孢杆菌宿主菌中两种外分泌蛋白酶‑‑‑枯草杆菌碱性蛋白酶的基因apr和枯草芽孢杆菌中性金属蛋白酶的基因npr以及产孢子基因spoIIAC被敲除。所得到的枯草芽孢杆菌宿主菌能够应用于基因工程手段高产外源蛋白。在此基础上，本发明成功构建了一株分泌普鲁兰酶的基因工程菌，能够高产普鲁兰酶，经过发酵工业研究在工业化生产中具有广阔的发展前景。
一株可高效表达分泌蛋白酶枯草芽孢杆菌

[发明专利]选育高核酸酵母、用高核酸酵母制备核糖核酸的方法-CN200810246981.2无效
发明人： 乔宾福;俞慧君;王秀文;吴晓倩 -专利权人：大连珍奥生物技术股份有限公司
申请日： 2008-12-24 - 公布日： 2010-12-29 - 主分类号： C12N1/18 文献下载
摘要：本发明涉及从酿酒酵母中选育高核酸酵母，采用大量酿酒酵母保藏菌种，在一个合适的酵母生长培养基中培养，选育原始菌株，原始菌株再经复筛和培养基的选择获得工业生产用高核酸酵母菌株，经毒力试验，菌体和代谢产物无致毒反应。本发明所采用的酿酒酵母是中国卫生部在可用于保健食品的真菌菌株群中第一推荐的，从酿酒酵母中选育高核酸酵母用于核酸的工业生产，选育的高核酸酵母菌株再次经微生物学鉴定是酿酒酵母，是传统用于生产啤酒的同一类菌株，在最佳培养条件下达到菌体内核酸含量12-14％(W/W)。可广泛用于大规模工业化生产，制备的核酸可以放心地用于保健食品、药品、婴儿食品等领域。
选育核酸酵母制备核糖核酸方法

[发明专利]高纯度5’核苷酸的生产新工艺-CN200810228964.6有效
发明人： 乔宾福;俞慧君;赵嘉庆;于喜庆;刘万峰;陈晓丽 -专利权人：大连珍奥生物技术股份有限公司
申请日： 2008-11-21 - 公布日： 2009-04-29 - 主分类号： C12P19/32 文献下载
摘要：本发明涉及5′核苷酸的生产工艺。深层发酵培养一株桔青霉菌株M-71，产生胞外的核酸酶P₁，将2.5～5％的核糖核酸溶液降解，降解率达80％以上，然后使用高频振动筛除去杂蛋白和残余核糖核酸，除杂质后的纯清的5′核苷酸溶液经陶瓷膜超滤，除去大分子残留物质，再用装有强碱性阴离子交换树脂的四根柱串联一次性吸附及分步洗脱、收集，收集到的四种单核苷酸溶液，选择切割分子量为300道尔顿的纳滤膜脱盐并浓缩，活性炭脱色，结晶和干燥后制得产品。本发明极好地分离了四种核苷酸，洗脱除去无机磷，保证制得高纯度的5′核苷酸产品，经HPLC检测产品纯度可达到98-102％。
纯度核苷酸生产新工艺

[发明专利]纳滤浓缩纯化核酸酶P₁及生产核苷酸的方法-CN200810228656.3无效
发明人： 乔宾福;俞慧君;霍旭辉 -专利权人：大连珍奥生物技术股份有限公司
申请日： 2008-11-10 - 公布日： 2009-03-25 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开一种纳滤浓缩纯化核酸酶P₁的方法，是选高活性的桔青霉菌株M71，在培养基中经液体深层发酵得到核酸酶P₁；用离心机除去菌体和培养基的固形物，得含核酸酶P₁的上清液；纳滤膜透析除去部分水、无机盐及色素。本发明还公开了用纳滤浓缩纯化核酸酶P₁生产核苷酸的方法，是用浓缩纯化核酸酶P₁降解核糖核酸；将降解液经过20nm～50nm的陶瓷膜超滤；将超滤液经切割分子量为300道尔顿的纳滤膜透析，除去无机盐、色素等杂物，得到浓缩的5′核苷酸溶液；将所得到浓缩的5′核苷酸溶液经升膜浓缩塔进一步浓缩，使固形物含量为35～45％，喷雾干燥或微波干燥制成5′核苷酸粉状产品。具有工序简单、收率高、成本低、质量稳定、可大规模生产等优点。
浓缩纯化核酸酶 sub 生产核苷酸方法

[发明专利]纳滤浓缩纯化核酸酶P₁及生产核苷酸的方法-CN200810013419.5无效
发明人： 乔宾福;俞慧君;霍旭辉 -专利权人：大连珍奥生物技术股份有限公司
申请日： 2008-09-27 - 公布日： 2009-02-11 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开一种纳滤浓缩纯化核酸酶P₁的方法，是选育高活性的桔青霉菌株M843，在培养基中经液体深层发酵得到核酸酶P₁；用离心机除去菌体和培养基的固形物，得含核酸酶P₁的上清液；纳滤膜透析除去部分水、无机盐及色素。本发明还公开了用纳滤浓缩纯化核酸酶P₁生产核苷酸的方法，是用浓缩纯化核酸酶P₁降解核糖核酸；将降解液经过20nm～50nm的陶瓷膜超滤；将超滤液经切割分子量为300道尔顿的纳滤膜透析，除去无机盐、色素等杂物，得到浓缩的5’核苷酸溶液；将所得到浓缩的5’核苷酸溶液经升膜浓缩塔进一步浓缩，使固形物含量为35～45％，喷雾干燥或微波干燥制成5’核苷酸粉状产品。具有工序简单、收率高、成本低、质量稳定、可大规模生产等优点。
浓缩纯化核酸酶 sub 生产核苷酸方法