本发明公开了一种NADP依赖型甲酸脱氢酶突变体、辅酶再生体系及其在制备L‑草铵膦铵盐中的应用,所述甲酸脱氢酶突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第198位、第221位、第246位、第272位或第379位中的一个或多个突变获得的。本发明甲酸脱氢酶突变体对NADP有较高亲和力,能高效地为氧化还原体系不断提供NADPH,突变体ApFDH‑A1对NAD的活力提高了0.38倍,对NADP的活力提高了11倍。利用甲酸脱氢酶突变体构建辅酶循环体系制备L‑草铵膦中,200mM底物转化率高达100%、副产物二氧化碳易于排出反应体系,产物分离纯化更方便,具有很好的应用前景。