本发明公开了一种基因重组巴曲酶,它具有以下特性:(a)分子量为29-32Kda;(b)所述重组巴曲酶中至少90%巴曲酶具有正确的6对二硫键配对:Cys7-Cys139,Cys26-Cys42,Cys74-Cys230,Cys118-Cys184,Cys150-Cys163和Cys1174-Cys199;(c)在SEQ ID NO:1中第146位和第225位被糖基化;和(d)所述巴曲酶的比活性大于1500KU/mg。
本发明是采用基因工程的方法,在甲醇酵母(Pichia pastoris)表达系统中生产重组人激肽释放酶-1(Recombinant Human Kallikrein-1,r-hK1),对r-hK1的发酵和层析纯化过程,特别是对其分子量、等电点、糖含量以及糖修饰类型等有关分子结构特征进行了描述。通过对r-hK1体外、体内活性的测定和试验,表明r-hK1可望成为治疗和预防脑梗塞的药物。
参考已经发现的人和鼠的几种肝再生增强因子(ALR,Augmenter of Liver Regeneration)的氨基酸序列和基因序列,人工合成人ALR基因的关键性区段,并将其插入到甲醇酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZaA中。实现在甲醇酵母中以分泌表达的方式生产具有医药用途的同源二聚体ALR蛋白及其突变体HRF等,所构造的甲醇酵母工程菌菌株上罐发酵时的表达产量不低于1.5g/L。