本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9靶向敲除人BNIP3基因的sgRNA、细胞系及应用。所述的sgRNA的靶DNA序列为序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列中的至少一种。将sgRNA的DNA双链中的正义链和反义链进行退火形成双链DNA;将双链DNA与线性化的含有绿色荧光的载体连接,得到含有靶向敲除人BNIP3基因的sgRNA和绿色荧光蛋白基因的质粒载体,同时辅以一个含有编码cas9的辅助质粒,得到双质粒敲除载体系统。将双质粒敲除载体系统转入到人靶细胞中,筛选,得到敲除人BNIP3基因的细胞系。该细胞系可在人细胞中线粒体自噬和细胞凋亡研究中的应用。
本发明公开了CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco‑2细胞模型及其方法,该方法用于非诊断或治疗目的,包括如下步骤对P‑gp、BCRP及MRP2转运体设计靶点特异性的sgRNA,设计的sgRNA序列如序列表中SEQ ID NO1‑6所示,构建sgRNA表达载体;利用CRISPR/CAS9分别设计P‑gp、BCRP及MRP基因单敲除及两两组合双敲除,与hCas9质粒共转染caco‑2细胞,进行单克隆化扩大培养,即得转运体基因靶向性的caco‑2细胞模型。本发明获得的caco‑2细胞模型将有效排除不同转运体之间相互干扰,为药物转运研究提供更特异、更灵敏的细胞模型。