本发明公开了一种提高γ‑聚谷氨酸产量的方法。该方法是通过突变基因rapA替换γ‑聚谷氨酸生产菌种中的rapA基因,使生产菌的γ‑聚谷氨酸产量显著提高。突变基因rapA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,第575位的碱基由A突变为G。贝莱斯芽孢杆菌PGA‑224含突变基因rapA,其保藏号为GDMCCNo.62295。本发明将突变的rapA基因替换γ‑聚谷氨酸生产菌种中rapA基因,γ‑聚谷氨酸产量显著提高。
本发明公开了一组克隆恶臭假单胞菌大片段DNA的载体及其应用。所述的质粒组合包含两个质粒pBCPP51和pBCPP52,序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示,能够有效地克隆细菌基因组中的特定的DNA区域,适用于10kb以上难以用PCR方法扩增的大片段。通过同源重组的方法,依次将携带同源臂的两个质粒插入到基因组中待克隆大片段的上游和下游,提取基因组并选用合适的限制性核酸内切酶进行单酶切,再将片段进行自连环化,得到包含待克隆片段的质粒,完成克隆后所得到质粒可在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中复制。