本发明公开了一种检测人类β‑地中海贫血基因分型的核酸组合及试剂盒与应用,该核酸组合包括用于检测β‑globin基因‑32、‑30、‑29、‑28、CD+40/43、Int、CD14/15、CD17、CD26、CD27/28、IVS1‑1、IVS1‑5、CD31、CD41/42、CD43、CD71/72和IVS‑II‑654位点的探针和引物;上述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑17所示,探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.18‑46所示。利用上述核酸组合制备的试剂盒在检测人类β‑地中海贫血基因突变时具有灵敏度高、特异性强、操作简单、省时、结果判读准确等优势。