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[发明专利]一种sPL生物制剂膜片的制备方法及其应用-CN202310570365.7在审
发明人： 芦慧颖;李洋;张怡;张斐然;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2023-05-19 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：一种sPL生物制剂膜片的制备方法及其应用，涉及卵巢早衰的治疗领域，是要解决现有方法中间充质干细胞的旁分泌能力和分化能力较弱，且间充质干细胞分泌的因子会快速释放的问题。方法：一、将sPL溶液在离心，取上清，过滤；二、将脐带间充质干细胞用过滤后的sPL溶液重悬，得到sPL细胞重悬液；三、将纤维蛋白膜片浸泡在sPL细胞重悬液中，使其变成水润膜状，即得到sPL生物制剂膜片。本发明使用纤维蛋白膜片吸附sPL重悬的MSCs细胞，纤维蛋白膜片可缓释，能持久停留在卵巢组织周围，提高治疗精准性，提高治疗效果。本发明用于治疗卵巢早衰。
一种 spl 生物制剂膜片制备方法及其应用

[发明专利]用于促进iPSC分化为胰岛素分泌细胞的混合物及其制备方法-CN202110430287.1有效
发明人：李洋;张怡;芦慧颖;李婷婷;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2021-04-21 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：用于促进iPSC分化为胰岛素分泌细胞的混合物及其制备方法，本发明是为了解决现有使用其他细胞诱导成功为胰岛细胞的诱导成功率较低的问题。制备方法：一、培养诱导性多能干细胞融合至45％～55％时，完全培养基培养，得到iPSC上清液；二、向iPSC上清液中加入PEG8000贮存液，混匀后离心，沉降得到iPSC外泌体；三、间充质干细胞用完全培养基重悬细胞，加入iPSC外泌体，混匀培养得到MSC上清液；四、对MSC上清液和iPSC上清液分别进行超滤、离心处理；五、将MSC外泌体和iPSC外泌体混合。本发明通过验证多次iPSC分化胰岛素分泌细胞实验后发现，细胞分化效率及胰岛素释放量，细胞标志物表达均有提高。
用于促进 ipsc 化为胰岛素分泌细胞混合物及其制备方法

[发明专利]促进骨愈合与再生的凝胶组合物的制备方法-CN202010549738.9有效
发明人： 芦慧颖;李婷婷;张怡;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2020-06-16 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： A61L27/36 文献下载
摘要：促进骨愈合与再生的凝胶组合物的制备方法，它涉及干细胞领域。它用于软骨损伤和骨缺损的修复。方法：一、sPL的制备；二、间充质干细胞趋向分化；三、凝胶组合物的制备。本发明制备出sPL后对所含生长因子含量进行检测，再调节生长因子浓度，保证PL的均一性。进行治疗前，先对间充质干细胞进行趋向分化，使干细胞向治疗所需要的方向分化，这样可以有效缩短治疗周期，加速修复、填补损伤部位所需种类细胞。可使细胞继续分化，提高治疗效果，节约治疗成本。可用于治疗骨缺损、骨不连、骨损伤，可促进骨的愈合与再生。对软骨损伤和骨缺损修复有显著效果，软骨表面趋于平滑，缺损部位骨全部修复。本发明应用于软骨损伤和骨缺损的修复。
促进愈合再生凝胶组合制备方法

[实用新型]一种sPL运输箱-CN202120137788.6有效
发明人：牛春玮;石亮;芦慧颖;刘艳青 -专利权人：武汉天晴干细胞有限公司
申请日： 2021-01-19 - 公布日： 2021-11-09 - 主分类号： B65D25/02 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种sPL运输箱，包括呈顶端开口的箱体，箱体内开凿有收纳槽，箱体的顶端卡合安装有封盖，封盖的底端固定安装有限位机构，且限位机构位于收纳槽内，限位机构上转动安装有第一转盘和第二转盘，第一转盘与第二转盘之间共同卡合安装有若干储存管，收纳槽内壁上转动安装有连接柱，箱体内固定安装有电机，电机的输出端与连接柱固定连接，本实用新型一种sPL运输箱，本运输箱设置有电机，通过电机带动连接柱转动，继而带动第一转盘、限位机构、第二转盘以及储存管转动，在运输过程中，由于储存管呈转动状态，能够防止血小板裂解液在储存管内产生沉淀，避免沉淀物出现而影响血小板裂解液的活性，有效延长了其储存周期。
一种 spl 运输

[发明专利]一种通用型慢病毒载体及其制备方法-CN201610594668.2有效
发明人：刘春香;张怡;芦慧颖;石佳宁;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2016-07-26 - 公布日： 2019-12-13 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：一种通用型慢病毒载体及其制备方法，涉及一种慢病毒载体及其其制备方法。本发明是要解决目前CAR‑T制备中过程中载体构建步骤烦琐、耗时过长，慢病毒载体无法通用，成本高的问题。该慢病毒载体以pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro质粒为骨架，向质粒骨架的多克隆位点MCS处插入以下元件：CD8α Leader DNA序列、CD8α铰链区、CD28跨膜区‑胞内区、CD137胞内区和CD3ζ。方法：一、引物设计；二、外周血单个核细胞的获得、激活；三、mRNA的提取及RT反应；四、重组质粒制备；五、合成单链CD8α Leader DNA序列；六、将线性载体、目的基因片段及CD8α Leader片段连接，即得到通用型慢病毒载体。本发明用于制备慢病毒载体。
一种通用型病毒载体及其制备方法

[发明专利]一种治疗慢性皮肤溃疡的干细胞制剂及制备方法-CN201510204930.3有效
发明人：张怡;孟庆雪;付寅生;芦慧颖;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2015-04-27 - 公布日： 2019-06-21 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：一种治疗慢性皮肤溃疡的干细胞制剂及制备方法，涉及一种干细胞制剂及其制备方法。本发明提供一种治疗慢性皮肤溃疡的干细胞制剂及制备方法。该制剂包括间充质干细胞、富血小板血浆裂解液和法舒地尔溶液。方法：一、对间充质干细胞进行分离纯化，传代培养，取P3代～P5代间充质干细胞；二、对P3代～P5代间充质干细胞进行病毒、无菌、免疫表型、细胞活率、分化功能的检测；三、制备富血小板血浆裂解液；四、间充质干细胞重悬于富血小板血浆裂解液，然后加入法舒地尔溶液，即可得到干细胞制剂；本发明可明显改善伤口愈合并缩短伤口愈合时间。本发明用于治疗慢性皮肤溃疡。
一种治疗慢性皮肤溃疡干细胞制剂制备方法

[实用新型]一种用于血小板裂解液回输的套装盒-CN201720878606.4有效
发明人： 芦慧颖;张怡;张宇;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2017-07-19 - 公布日： 2019-01-04 - 主分类号： A61J1/05 文献下载
摘要：一种用于血小板裂解液回输的套装盒，它涉及一种套装盒，本实用新型为了解决上述目前血小板裂解液运输中容易沉淀，降解，泄露等问题。本实用新型通过在套装盒内设置的多个凹槽放置注射针头、西林瓶和螺口注射器；并将套装盒置于冷冻盒内进行冷冻保存，并通过将西林瓶置于不倒翁内，通过弹簧进行固定，运输中达到轻微晃动的目的，防止血小板裂解液沉淀。本实用新型的结构能够防止血小板裂解液降解，以及污染的情况发生。
血小板裂解液套装盒本实用新型西林瓶回输降解沉淀冷冻保存注射针头不倒翁冷冻盒注射器弹簧晃动螺口运输泄露污染

[发明专利]一种治疗骨性关节炎的组合物的制备方法-CN201510084846.2有效
发明人：张怡;芦慧颖;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2015-02-16 - 公布日： 2018-12-11 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：一种治疗骨性关节炎的组合物的制备方法，涉及一种组合物、其制备方法及其应用。本发明提供一种治疗骨性关节炎的组合物、其制备方法及其应用。该组合物的有效成分包括间充质干细胞和细胞因子，细胞因子由富含FGF2的血浆和富含VEGF的血浆。方法：一、富血小板血浆制备；二、富FGF2因子血浆制备；三、富VEGF因子血浆制备；四、将富FGF2因子血浆和富VEGF因子血浆混合，将混合后的血浆在25～60mmHg氧分压下平衡，加入间充质干细胞，即得到治疗骨性关节炎的组合物。在组合物制备过程中，采用了与人类关节内氧分压相似的供氧环境，促进了干细胞的适应能力，起到更好的骨性关节炎修复作用。用于制备治疗骨性关节炎药物。
制备治疗骨性关节炎血浆间充质干细胞细胞因子氧分压富含组合物制备过程富血小板血浆骨性关节炎供氧环境人类关节血浆混合干细胞应用修复平衡

[发明专利]一种培养脐血类胚胎干细胞的方法及鉴定和应用-CN201510084811.9有效
发明人：张怡;芦慧颖;刘艳青 -专利权人：天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2015-02-16 - 公布日： 2018-02-27 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：一种培养脐血类胚胎干细胞的方法及鉴定和应用，它涉及一种培养干细胞的方法及鉴定和应用。培养方法为一、脐血的采集；二、脐血的分离；三、脐血类胚胎干细胞培养皿的包被；四、脐血类胚胎干细胞的培养扩增。本发明的脐血类胚胎干细胞用于辅助恢复损伤的淋巴细胞。本发明培养基配方采用了多种细胞因子，稳定细胞维持生物特性，促进细胞增殖。本发明采用laminin(层粘连蛋白)对培养皿进行包被，laminin有助于细胞贴壁，有效缩短了细胞贴壁时间，提高了细胞与皿底的粘连程度，使细胞贴壁更牢固。
一种培养脐血类胚胎干细胞方法鉴定应用

[发明专利]一种NK细胞体外扩增组合物及NK细胞扩增方法-CN201610451780.0在审
发明人：张怡;刘春香;芦慧颖;李琳;王浩宇;车彦川;刘艳青 -专利权人：黑龙江天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2016-06-21 - 公布日： 2016-10-05 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：一种NK细胞体外扩增组合物及NK细胞扩增方法，涉及一种NK细胞扩增组合物及扩增方法。本发明是要解决目前NK细胞扩增倍数低、纯度低、扩增周期长、成本高的问题。该组合物包括NK扩增滋养细胞、IL‑2、灭活的自体血浆和GT‑T551 H3培养基。扩增方法：用GT‑T551 H3培养基将PBMCs重悬后，接入培养瓶，加入IL‑2、NK扩增滋养细胞及自体血浆，体外共培养15天，其中培养第7天时补加一次NK扩增滋养细胞，培养过程中补充培养基，培养13和15天收集细胞进行检测。该组合物可显著促进NK细胞的大量扩增，满足临床应用需求，获得的NK细胞纯度较高，节省了成本，提高杀伤活性。本发明用于扩增NK细胞。
一种 nk 细胞体外扩增组合方法

[发明专利]一种采用血清替代物建立人脐带间充质干细胞库的方法-CN201610311244.0在审
发明人： 芦慧颖;张怡;孟庆雪;刘春香 -专利权人：黑龙江天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2016-05-11 - 公布日： 2016-09-28 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：一种采用血清替代物建立人脐带间充质干细胞库的方法，它涉及一种建立干细胞库的方法。步骤如下：分离脐带华通胶，加入无血清培养基中培养，每5天更换一次培养基，待细胞长满至70％，传代；重新收集组织块，加入无血清培养基中二次培养，每5天更换一次培养基，待细胞长满至70％，传代。经传代培养，冻存后建立脐带间充质干细胞库。本发明采用了无血清培养、冻存体系建立细胞库，以及组织块二次爬片方法。本发明优势在于有效利用所有组织，让细胞尽可能的爬出，获得细胞数量是传统方法的2倍。本发明细胞培养体系采用血清替代物替代牛源血清，胰酶替代物替代猪源胰酶，有效的避免了动物源性对人源的污染，省去了检测牛源、猪源的质控环节。
一种采用血清替代建立脐带间充质干细胞方法

[实用新型]一种用于细胞制剂注射和回输用的套装盒-CN201520429877.2有效
发明人： 芦慧颖;张怡;刘艳青 -专利权人：黑龙江天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2015-06-19 - 公布日： 2015-10-07 - 主分类号： B65D25/04 文献下载
摘要：一种用于细胞制剂注射和回输用的套装盒，本实用新型涉及一种用于细胞制剂注射、回输用的套装盒，它为了解决细胞制剂在运输过程中易发生聚团、自溶以及温度变化导致细胞制剂活率降低的问题。该套装盒包括盒体、盒盖、两个隔板、多个回输袋固定带、注射器固定带和2个海绵填充块，盒体通过第一隔板分隔成文档区和工作区，工作区通过第二隔板分隔成样本区和冷冻区，2个海绵填充块分别填充到文档区和样本区中，样本区中的海绵填充块在垂直方向开有相通的回输袋槽和注射器槽，在回输袋槽和注射器槽上设置有固定带。本实用新型能够保证注射器/袋稳定，防止运输过程产生的剪切力，提高了细胞活性。
一种用于细胞制剂注射回输用套装

[实用新型]一种封闭式快速制备血小板裂解液装置-CN201520123840.7有效
发明人：张怡;芦慧颖;刘艳青 -专利权人：黑龙江天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2015-03-03 - 公布日： 2015-07-08 - 主分类号： A61M1/02 文献下载
摘要：一种封闭式快速制备血小板裂解液装置，它涉及一种血小板裂解液制备装置。本实用新型目的是为了克服上述手动、开放式制备血小板裂解液的不足。它包括采血袋、转移袋、冻融袋、16G采血针、针套、管道、止流夹一、止流夹二、止流夹三、连接管一和连接管二。本实用新型构思简洁，能够在封闭环境下分离血小板和血小板裂解液，没有人员和样本的直接接触，减少了被污染的机会提高了分离过程的安全性，节省了时间。
一种封闭式快速制备血小板裂解装置

[发明专利]一种制备牙髓间充质干细胞及建立牙髓间充质干细胞库的方法及细胞复苏方法-CN201510056179.7在审
发明人： 芦慧颖;张怡;王春梅;刘艳青 -专利权人：黑龙江天晴干细胞股份有限公司
申请日： 2015-02-03 - 公布日： 2015-05-20 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：一种制备牙髓间充质干细胞及建立牙髓间充质干细胞库的方法及细胞复苏方法，它涉及一种制备干细胞库的方法及细胞复苏方法。本发明步骤如下：将牙齿的髓腔打开，经胰酶替代物半消化法对牙髓组织进行原代培养，经过传代培养即获得牙髓间充质干细胞，将制备的牙髓间充质干细胞进行生物特性检测，扩大培养，冻存，建立牙髓干细胞库。本发明采用了胰酶替代物半消化法对牙髓组织进行消化，这与传统的消化法不同，胰酶替代物价格便宜容易购买，半消化法有效防止了细胞的丢失，提高了细胞的冻存数量。本发明采用了牙齿作为制备间充质干细胞的组织材料来源，为储存牙间充质干细胞提供了机会。
一种制备牙髓间充质干细胞建立方法细胞复苏

[发明专利]人脂肪干细胞的获取方法及多级同种异体脂肪干细胞库的构建方法-CN201410525337.4无效
发明人：张怡;王灵娟;芦慧颖;王浩宇;梁丽潮;付寅生;赵新新 -专利权人：黑龙江天晴干细胞有限公司
申请日： 2014-10-08 - 公布日： 2015-02-18 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：人脂肪干细胞的获取方法及多级同种异体脂肪干细胞库的构建方法，涉及一种脂肪干细胞的获取方法及脂肪干细胞库的构建方法。为了解决现有人脂肪干细胞的获取方法，脂肪采集方法对细胞活性破坏大及现有脂肪干细胞库中干细胞多次传代后给多人使用容易出现干细胞老化现象的问题。干细胞获取方法：一、供者的筛选；二、脂肪采集；三、脂肪的运输；四、人脂肪干细胞的分离。干细胞库的构建方法：一、供者的筛选；二、脂肪采集；三、脂肪的运输；四、人脂肪干细胞的分离；五、脂肪干细胞培养、传代、扩增；六、主细胞库建立；七、工作细胞库建立。本发明方法对细胞活性破坏较小，并建立了多人份异体使用的多级干细胞库，用于脂肪干细胞库的建立。
脂肪干细胞获取方法多级同种异体构建

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