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[发明专利]一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞过氧化氢酶酶活力方法-CN201611056539.4在审
发明人：管莹;熊国行;夭建华;李雪梅;米其利;高茜;朱洲海 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-11-25 - 公布日： 2017-03-22 - 主分类号： C12Q1/30 文献下载
摘要：本发明公开一种检测卷烟烟气总粒相物对细胞过氧化氢酶酶活力方法，包括以下步骤(1)受试物的前处理；(2)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的制备；(3)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度的计算；(4)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞接种；(5)受试物的分组；(6)受试物检测剂量的设定；(7)受试物培养品的制备；(8)受试物的孵育；(9)受试物孵育品的收集；(10)受试物孵育品的裂解离心；(11)标准曲线的测定；(12)受试物孵育品的测定；(13)蛋白浓度测定；(14)过氧化氢酶酶活力计算。本发明的方法能够准确有效的检测卷烟烟气总粒相物对细胞过氧化氢酶酶活力影响的方法。
一种检测卷烟烟气总粒相物细胞过氧化氢酶活力方法

[发明专利]一种检测口含烟制品对细胞炎症效应因子分泌量影响方法-CN201611055891.6在审
发明人：管莹;李雪梅;夭建华;米其利;高茜;朱洲海;唐萍 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-11-25 - 公布日： 2017-03-15 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开一种检测口含烟制品对细胞炎症效应因子分泌量影响方法，包括以下步骤(1)受试物的前处理；(2)人口腔角质细胞单细胞悬浮液的制备；(3)人口腔角质细胞单细胞悬浮液的细胞浓度的计算；(4)人口腔角质细胞单细胞悬浮液的细胞接种；(5)受试物的分组；(6)受试物检测剂量的设定；(7)受试物培养品的制备；(8)受试物的孵育；(9)受试物孵育品的收集；(10)标准溶液配制；(11)添加待测样；(12)添加抗体；(13)添加结合液；(14)显色；(15)测量吸光值；(16)细胞因子分泌量测定。本发明的方法能够准确有效的检测卷烟烟气总粒相物对细胞炎症效应因子分泌影响。
一种检测口含烟制品细胞炎症效应因子分泌影响方法

[实用新型]一种线虫定向趋利、趋避检测装置-CN201620848603.1有效
发明人：高茜;向阳;黄海涛;管莹;夭建华;李雪梅;刘欣;米其利;朱洲海 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-08 - 公布日： 2017-03-15 - 主分类号： G01N33/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种线虫定向趋利、趋避检测装置，其包括培养皿(1)，所述培养皿(1)包括线虫滴加孔(4)，位于所述培养皿(1)的中部；多个线虫运动凹槽(2)，在培养皿(1)中成放射状分布，其一端与所述线虫滴加孔(4)连通；对照样加样孔(3)，与所述多个线虫运动凹槽(2)的其中一个的另一端连通；待测样品加样孔(5)，与剩余的所述多个线虫运动凹槽(2)的另一端连通。本实用新型的检测装置克服了平板区域方法计数线虫所局限的线虫不规则运动状态，且能实时观察线虫的迁移状态并进行记录；对照和待测样品间不会相互扩散，增加实验的准确性；提高实验效率。
一种线虫定向趋利趋避检测装置

[发明专利]一种检测胶基型烟草制品对人口腔细胞γH2AX水平影响的方法-CN201610729383.5在审
发明人：高茜;李雪梅;夭建华;朱洲海;黄海涛;倪红梅;管莹;米其利;刘欣 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-26 - 公布日： 2017-02-01 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测胶基型烟草制品对人口腔细胞γH2AX水平影响的方法，包括以下步骤(1)将待测的所述胶基型烟草制品置于液氮中冷冻；(2)将所述胶基型烟草制品立即用粉碎机将其粉碎；(3)再次将碎末胶基型烟草制品置于液氮中冷冻；(4)将碎末胶基型烟草制品用人工唾液浸泡；(5)将提取液离心分离；(6)用渗透压测定仪测定上层清液，调节其渗透压与细胞培养基一致；(7)测定提取液中的烟碱含量；(8)培养人口腔黏膜上皮细胞作为检测对象；(9)将胶基型烟草制品提取液加入到培养好的人口腔黏膜上皮细胞中；(10)经过4小时的培育后，用高内涵成像仪检测细胞γH2AX变化情况。
一种检测胶基型烟草制品人口细胞 h2ax 水平影响方法

[发明专利]用于生物学检测的卷烟纸燃烧产物捕集方法-CN201410464442.1有效
发明人：缪明明;黄海涛;夭建华;米其利;耿永勤;朱洲海;李雪梅;徐济仓;高茜;周岚;曾婉俐;管莹 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2014-09-12 - 公布日： 2017-02-01 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于生物学检测的卷烟纸燃烧产物捕集方法，属于生物技术领域。包括如下步骤步骤（1），将卷烟纸剪成9.9‑10.1cm×1‑2mm的细条小纸片，均匀充填进燃烧管中，得到充填有卷烟纸的燃烧管；步骤（2），将步骤（1）得到的充填有卷烟纸的燃烧管置于镜面反射炉中，于卷烟纸燃烧条件下进行燃烧试验；步骤（3），采用一种用于卷烟纸添加剂热裂解产物直接暴露的装置，以一级溶液捕集方式对卷烟纸燃烧产物进行捕集，捕集液为二甲基亚砜。本发明方法简单实用，可操作性强，能全面有效的捕集卷烟纸燃烧产物，可用于后续的生物学试验。
用于生物学检测卷烟燃烧产物方法

[发明专利]一种检测卷烟主流烟气总粒相物的体外细胞微核方法-CN201410386232.5有效
发明人：高茜;缪明明;夭建华;曾婉俐;朱洲海;管莹;米其利;李雪梅 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2014-08-07 - 公布日： 2017-01-25 - 主分类号： G01N15/10 文献下载
摘要：本发明是一种检测卷烟主流烟气总粒相物的体外细胞微核方法。该方法是将细胞种植在96孔板上进行卷烟烟气染毒后直接固定、染色、上高内涵成像系统进行检测。根据细胞核的荧光值与背景荧光值之差设置细胞主核及微核荧光强度参数，测量细胞主核及微核的大小设置核直径参数，根据细胞核之间的距离设置距离参数。根据以上设定对图片进行分析，在结果导出栏选择具有微核的双核细胞数及双核细胞总数，从而计算出微核率。本方法需要的细胞量少，不需要消化细胞和制作微核片，并且检测速度快，样本量大、准确率高。
一种检测卷烟主流烟气总粒相物体外细胞方法

[发明专利]一种卷烟滤嘴提取液的模拟提取方法-CN201410452519.3有效
发明人：李雪梅;朱洲海;米其利;高茜;曾婉俐;黄海涛;管莹;夭建华;徐济仓 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2014-09-05 - 公布日： 2017-01-04 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明涉及一种卷烟滤嘴提取液的模拟提取方法，此方法模拟卷烟滤嘴与人口腔的浸润接触状态的卷烟滤嘴提取液的提取方法。该方法包括如下步骤：随机抽取60支卷烟，将卷烟沿滤棒与烟丝接触的边缘处切割下滤嘴作为试样备用；随机抽取切割好的20个试样，置于带塞子的第一提取容器中，然后按照每个滤嘴5mL的加水量加入蒸馏水；5s后再将第一提取容器中的水倒入第二提取容器中，使第一提取容器中的试样处于表面浸润状态；将第一提取容器和第二提取容器盖紧容器塞子后同时放入恒温水浴箱中，40℃静置30min；将第二提取容器中的水再次倒入装有试样的第一提取容器中进行淋洗，5s后再将水倒回第二提取容器中，即得到卷烟滤嘴提取液，可进行后续的化学分析和生物学分析。
一种卷烟提取模拟方法

[发明专利]一种高效介导T1R2基因过表达的慢病毒载体和慢病毒及其构建方法-CN201610628939.1在审
发明人：朱洲海;夭建华;李雪梅;缪明明;高茜;米其利;管莹;唐萍 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-03 - 公布日： 2016-12-21 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效介导T1R2基因过表达的慢病毒载体和慢病毒及其构建方法，属于分子生物学技术领域。本发明通过基因重组技术，以pCDH‑CMV‑MCS‑SV40‑Neo慢病毒表达载体为基础进行构建，并整合有T1R2基因，得到T1R2基因过表达慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑SV40‑Neo‑T1R2。使用慢病毒包装质粒pLP/VSVG、pLP1和pLP2对T1R2基因过表达慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑SV40‑Neo‑T1R2进行包装，通过转染HEK293细胞，得到T1R2慢病毒。本发明所构建的T1R2基因过表达慢病毒载体对宿主细胞的转染效率高，能特异、持续、高效地促进T1R2基因在宿主细胞中的稳定表达。
一种高效 t1r2 基因表达病毒载体及其构建方法

[发明专利]一种高效介导Gα基因过表达的慢病毒载体和慢病毒及其构建方法-CN201610628996.X在审
发明人：夭建华;朱洲海;李雪梅;缪明明;米其利;管莹;高茜;刘欣 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-03 - 公布日： 2016-12-21 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效介导Gα基因过表达的慢病毒载体和慢病毒及其构建方法，属于分子生物学技术领域。本发明通过基因重组技术，以pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP慢病毒表达载体为基础进行构建，并整合有Gα基因，得到Gα基因过表达慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP‑Gα。使用慢病毒包装质粒pLP/VSVG、pLP1和pLP2对Gα基因过表达慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑copGFP‑Gα进行包装，通过转染HEK293细胞，得到Gα慢病毒。本发明所构建的Gα基因过表达慢病毒载体对宿主细胞的转染效率高，能特异、持续、高效地促进Gα基因在宿主细胞中的稳定表达。
一种高效基因表达病毒载体及其构建方法

[发明专利]一种T1R3基因过表达慢病毒载体、慢病毒及其构建方法-CN201610629829.7在审
发明人：夭建华;朱洲海;李雪梅;缪明明;管莹;高茜;米其利;唐萍 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-03 - 公布日： 2016-12-21 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种T1R3基因过表达慢病毒载体、T1R3慢病毒及其构建方法，属于分子生物学技术领域。本发明通过基因重组技术，以pLVX‑Puro慢病毒表达载体为基础进行构建，并整合有T1R3基因，得到T1R3基因过表达慢病毒载体pLVX‑Puro‑T1R3。使用慢病毒包装质粒pRSV‑Rev、pMDlg‑pRRE和pMD2.G对T1R3基因过表达慢病毒载体pLVX‑Puro‑T1R3进行包装，通过转染HEK293细胞，得到T1R3慢病毒。本发明所构建的T1R3基因过表达慢病毒载体对宿主细胞的转染效率高，能特异、持续、高效地促进T1R3基因在宿主细胞中的稳定表达。
一种 t1r3 基因表达病毒载体及其构建方法

[发明专利]一种检测胶基型烟草制品对人口腔细胞体外微核影响的方法-CN201610728015.9在审
发明人：高茜;夭建华;黄海涛;米其利;李雪梅;倪红梅;唐萍;朱洲海;管莹 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-26 - 公布日： 2016-12-21 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开一种检测胶基型烟草制品对人口腔细胞体外微核影响的方法，包括以下步骤：(1)将待测胶基型烟草制品置于液氮中冷冻；(2)将冷冻的胶基型烟草制品立即用粉碎机将其粉碎；(3)再次冷冻；(4)将碎末胶基型烟草制品用人工唾液浸泡；(5)将提取液离心分离；(6)用渗透压测定仪测定上层清液，调节其渗透压与细胞培养基一致；(7)测定提取液中的烟碱含量；(8)培养人口腔黏膜上皮细胞作为检测对象；(9)将提取液加入到培养好的人口腔黏膜上皮细胞中；(10)经过培育后，用高内涵成像仪检测细胞体外微核情况。
一种检测胶基型烟草制品人口细胞体外影响方法

[发明专利]一种检测胶基型烟草制品对人口腔细胞凋亡影响的方法-CN201610728636.7在审
发明人：高茜;夭建华;李雪梅;管莹;黄海涛;倪红梅;唐萍;朱洲海;米其利 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-26 - 公布日： 2016-12-21 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开一种检测胶基型烟草制品对人口腔细胞凋亡影响的方法，包括以下步骤：(1)将待测的所述胶基型烟草制品置于液氮中冷冻；(2)将冷冻的胶基型烟草制品立即用粉碎机将其粉碎；(3)再次将碎末胶基型烟草制品置于液氮中冷冻；(4)将碎末胶基型烟草制品用人工唾液浸泡；(5)将提取液离心分离；(6)用渗透压测定仪测定上层清液，调节其渗透压与细胞培养基一致；(7)测定提取液中的烟碱含量；(8)培养人口腔黏膜上皮细胞作为检测对象；(9)将胶基型烟草制品提取液加入到培养好的人口腔黏膜上皮细胞中；(10)经过不超过于24小时的培育后，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
一种检测胶基型烟草制品人口细胞影响方法

[发明专利]一种检测胶基型烟草制品对人口腔微生物体外影响的方法-CN201610726375.5在审
发明人：高茜;黄海涛;李雪梅;倪红梅;夭建华;曾婉俐;米其利;管莹;唐萍;朱洲海 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-08-26 - 公布日： 2016-12-14 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测胶基型烟草制品对人口腔微生物体外影响的方法，包括以下步骤：(1)将待测的胶基型烟草制品于液氮中冷冻；(2)将胶基型烟草制品用粉碎机将其粉碎；(3)再次将碎末胶基型烟草制品冷冻；(4)将碎末胶基型烟草制品用人工唾液浸泡；(5)将提取液离心分离；(6)用渗透压测定仪测定；(7)测定提取液中的烟碱含量；(8)体外培养人口腔微生物；(9)将胶基型烟草制品提取液加入到培养好的人口腔微生物中；(10)查看生长情况并进行菌落计数。
一种检测胶基型烟草制品人口微生物体外影响方法

[实用新型]一种气相物质对线虫运动能力影响测定装置-CN201620748563.3有效
发明人：高茜;向阳;夭建华;管莹;李雪梅;倪红梅;米其利;朱洲海 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-07-15 - 公布日： 2016-12-14 - 主分类号： A01K67/033 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种气相物质对线虫运动能力影响测定装置，其包括：容器(5)，在其侧面具有容积刻度(8)，其上具有透明盖板(9)，透明盖板(9)上具有垂直拉手(10)；容器(5)内容纳有培养皿(3)，内置线虫培养基(4)，所述容器(5)具有进气管(1)和排气管(6)，进气管(1)具有进气管盖(2)，排气管(6)为鹅颈状，具有排气管盖(7)，两个管盖盖上时能防止气体进出。本实用新型将培养皿(3)中的线虫与气相物质直接接触，更符合气相物质的作用方式，可方便地考察气相物质对线虫运动能力的影响。
一种物质线虫运动能力影响测定装置

[实用新型]用于香精香料注射仪的烟支导向接收装置-CN201620638755.9有效
发明人： 米其利;李雪梅;夭建华;朱昆;杨叶昆;楼牧梦;管莹;朱洲海;高茜 -专利权人：云南中烟工业有限责任公司
申请日： 2016-06-24 - 公布日： 2016-12-14 - 主分类号： A24B15/24 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于香精香料注射仪的烟支导向接收装置，包括烟支导向板和接收盒，烟支导向板由烟支I级导向板、烟支II级导向板和烟支III级导向板组成，烟支I级导向板的顶端设有橡胶层并与香精香料注射仪的烟支出口相连，烟支导向板的外壁通过可调式旋钮与次级导向板的外壁连接，烟支III级导向板的底端与接收盒的底部相连，烟支导向板的长度和倾斜角度通过可调式旋钮调节。本实用新型可以实现香精香料注射完毕的烟支通过一定长度和倾斜角度的三级烟支导向板连续滑落至接收盒内，避免了烟支直接或间接下落造成的端部烟丝掉落，极大提高了注射烟支的香精香料/烟支质量比的一致性和后续实验的精确度。
用于香精香料注射导向接收装置