本发明属于人源化抗体制备技术领域,尤其涉及抗新冠病毒S蛋白人源化抗体及其应用。所述抗新冠病毒S蛋白人源化抗体互补决定区来源于兔源单克隆抗体1H1,框架区来源于人类抗体;轻链框架区1、轻链框架区2、轻链框架区3和轻链框架区4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:11‑14所示;重链框架区1、重链框架区2、重链框架区3和重链框架区4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:15‑18所示。本发明通过改造兔源单克隆抗体1H1的框架区,在大大降低或者基本消除抗体的免疫原性、提高生物安全性高生物的同时,具有与亲本抗体相当的亲和力和特异性,而且结合新冠病毒的能力强,对多种变异株具有提高的中和活性。