本发明公开了一种针对可以同时检测猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、经典猪瘟病毒（CSFV）和猪乙型脑炎病毒（JEV）的多重RT‑qPCR试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括如序列表SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12所示的引物和探针。所述的检测方法是将血液、脑组织、肝、肺、脾、肾、淋巴结、扁桃体等猪组织作为待测样品，先进行总DNA/RNA提取，然后将得到的总DNA/RNA作为模版，再加入上述引物和探针配制得到扩增反应液进行RT‑qPCR扩增，通过读取荧光定量PCR仪自带软件绘制的扩增曲线所对应的Ct值来进行结果判定，从而确定区分以上病毒。本发明具有灵敏度高、特异性高、操作简单的优点，可以同时、快速、准确的检测四种病毒，为实验室检测区分这四种病毒提供了有效的技术手段。
本发明公开了一种结核分枝杆菌复合群快速检测诊断试剂盒，包括引物对以及探针，所述的引物对为：上游引物IS1081‑F1与下游引物IS1081‑R1，两者序列如SEQ ID NO.1~2所示；所述的探针为探针IS1081‑P1，其序列如SEQ ID NO.3所示；本发明还提供一种结核分枝杆菌复合群快速检测诊断试剂盒的制备方法，包括以下步骤：S1设计引物对；S2形成混合体系；S3标准样扩增；S4判定灵敏性与特异性针；S5判定设计的探针位点；S6筛选得到所述引物对和探针；本发明的有益效果是；通过特定的引物对，以及设置的探针，使标准基因和样品基因能够大量的扩增，同时采用特异性基因位点IS1081，实现高精确度。
