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[发明专利]一种MSX残留的HPLC柱前衍生化检测方法-CN201810410377.2有效
发明人：张文宇;白羊;李义嘉;郭*;章永垒;阮卡;葛平辉;王明灶;陈星 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2018-05-02 - 公布日： 2021-05-25 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种MSX残留的HPLC柱前衍生化检测方法。包括精密吸取标准溶液或待测溶液加入离心管中，加入三乙胺溶液和异硫氰酸苯酯溶液，混匀后室温反应，再加入正己烷混匀，静置，取下相滤膜过滤后得到衍生化标准品或衍生化待测样品；分别将衍生化标准品或衍生化待测样品上样到HPLC柱中检测；按照上述HPLC检测的色谱条件进样分析，以标准溶液的不同浓度梯度浓度x、峰面积y绘制标准曲线；再将待测溶液的MSX的峰面积代入所得的标准曲线，从而计算出待测溶液中MSX的含量。快速方便、准确度高、重复性好，成本低，适用性好，能满足不同MSX残留量水平的检测需要，在药物研发和生产的质量控制中具有极大的应用价值。
一种 msx 残留 hplc 衍生检测方法

[发明专利]一种抗人神经生长因子抗体的电荷异构体分离方法-CN201811553816.1有效
发明人：张文宇;邹有土;阮卡;王明灶;马燕玲;黄奋飞;陈振雄 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2018-12-18 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： C07K16/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗人神经生长因子抗体的电荷异构体分离方法。包括先经过亲和层析，将收集到的洗脱峰的pH调节为5.0‑5.50；电导调节至4.90‑5.10ms/cm；再经过阴离子交换层析柱，待出现穿透峰且A280吸收值达到20mAU时，开始收集流穿液，收集到的流穿液即为去除电荷异构体后的抗人神经生长因子。采用本发明的方法获得的抗人神经生长因子抗体的电荷异构体收率高，活性好。
一种神经生长因子抗体电荷异构体分离方法

[发明专利]一种GS表达系统细胞株的筛选方法-CN201711452716.5有效
发明人：张文宇;马燕玲;阮卡;邹有土;王明灶;葛平辉;章永垒;陈星 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2017-12-28 - 公布日： 2020-10-16 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种GS表达系统细胞株的筛选方法，筛选步骤为将含目的基因的表达载体转染宿主细胞后在蛋氨酸亚氨基代砜加压条件下，于37℃，5％CO2培养箱中培养3～4周,检测发酵液表达量，筛选阳性克隆细胞，放大培养到细胞活率达到85％以上，再用有限稀释法进行单克隆化筛选，筛选时需同时在96孔板中加入密度为1×104～1×105个/孔的宿主细胞并于37℃，5％CO2培养箱中培养3～5周后，筛选出阳性单克隆细胞株，即得GS表达系统细胞株。本发明所述筛选方法，克隆化时加入密度为1×104～1×105个/孔的宿主饲养细胞，克隆效率平均可达到22.1％，单克隆化效率大幅提升。
一种 gs 表达系统细胞株筛选方法

[发明专利]一种抗人神经生长因子scFv抗体及制备方法-CN201711452295.6有效
发明人：张文宇;邹有土;阮卡;马燕玲;王明灶;陈星;章永垒;葛平辉 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2017-12-28 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： C07K16/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗人神经生长因子scFv抗体及制备方法。其至少具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链可变区、如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的轻链可变区和位于两者之间的连接肽。按照本发明的制备方法可获得纯度大于90％的抗人神经生长因子scFv抗体。该方法成本低廉，具有广阔的市场前景。制备获得的抗人神经生长因子scFv抗体经体外细胞生物学活性检测，具备高效的与人神经生长因子的结合能力(IC50为123ng/ml)。
一种神经生长因子 scfv 抗体制备方法

[发明专利]一种重组β-hNGF-Fc融合蛋白、制备方法及用途-CN201610617323.4有效
发明人：张文宇;黄奋飞;章永垒;白羊;陈星;阮卡;陈胜亮;葛平辉;邹有土;马燕玲;王明灶 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2016-07-29 - 公布日： 2019-10-15 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组β‑hNGF‑Fc融合蛋白、制备方法及用途。其依次由人βNGF、短肽接头和人IgG Fc所示氨基酸序列组成。所述重组β‑hNGF‑Fc融合蛋白在摩尔基础上，具有与人NGF相当或更高的体外生物活性。本发明还保护含有所述重组β‑hNGF‑Fc融合蛋白的重组子和细胞株，具有用于周围神经病变、神经损伤的恢复及神经生长因子长效化应用的用途。
一种重组 hngf fc 融合蛋白制备方法用途

[发明专利]蛋白序列12G12及其用途-CN201811143872.8在审
发明人：张文宇;白羊;葛平辉;张聪慧;王明灶 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2018-09-29 - 公布日： 2019-01-15 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种蛋白序列。所述序列如SEQ ID NO:1所示。对应的核酸序列为SEQ ID NO:2。该蛋白序列具有用于AXL抑制剂，在A549和MDA‑MB‑231细胞中抑制AXL磷酸化，在细胞中抑制AXL磷酸化的用途，进一步具有抑制肿瘤细胞活性的用途。
蛋白序列磷酸化抑制肿瘤细胞种蛋白序列细胞核酸

[发明专利]一种快速检测CHO细胞发酵液中重组人神经生长因子含量的方法-CN201610569958.1有效
发明人：张文宇;白羊;章永垒;陈星;黄奋飞;阮卡;葛平辉;邹有土;马燕玲;陈胜亮;王明灶 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2016-07-20 - 公布日： 2019-01-01 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速检测CHO细胞发酵液中重组人神经生长因子含量的方法。具体采用丁基硅烷键合硅胶反相C4柱的色谱柱；流动相：A为0.1体积%三氟乙酸水溶液，B为0.1体积%三氟乙酸乙腈溶液，0.22μm滤膜过滤，超声脱气10min后使用，变梯度洗脱，极性有机溶剂的浓度为连续性递增：0‑30min由10体积%B升到40体积%B，30‑35min由40体积%B升到90体积%B，35‑36min由90体积%B降到10体积%B，36‑41min维持10体积%B 5min；最后进行含量计算即可。该检测方法准确度高、精密度好，系统适用性、回收率、线性关系、稳定性好。
一种快速检测 cho 细胞发酵重组神经生长因子含量方法

[发明专利]一种从哺乳动物细胞培养物中分离重组人神经生长因子的方法-CN201610882905.5在审
发明人：张文宇;黄奋飞;章永垒;白羊;陈星;陈胜亮;阮卡;葛平辉;邹有土;马燕玲;王明灶 -专利权人：未名生物医药有限公司
申请日： 2016-10-10 - 公布日： 2017-03-08 - 主分类号： C07K14/48 文献下载
摘要：本发明公开了一种从哺乳动物细胞培养物中分离重组人神经生长因子的方法。步骤为，强阳离子交换层析将澄清后的哺乳动物细胞培养物上清加样到强阳离子交换层析树脂上，并使用洗脱缓冲液进行洗脱得到第一重组人神经生长因子；疏水层析将第一重组人神经生长因子处理后加样到疏水作用层析树脂上，并使用洗脱缓冲液洗脱得到第二重组人神经生长因子即可。所述方法操作步骤更少，缩短了生产周期、提高了回收率，纯度高，均一性好，体外生物活性极高，通常大于1.5×105 U/mg，远高于市场中注射用鼠神经生长因子（0.5×105 U/mg）。
一种哺乳动物细胞培养分离重组神经生长因子方法

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