本发明属于分子技术领域,具体提供了一种sgRNA、CRISPR/Cas9载体及其构建方法和用途,其中sgRNA包括核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.10所示的APOE‑sgRNA2,和核苷酸序列如SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.15所示的LDLR‑sgRNA3。本发明通过特定的sgRNA构建的CRISPR/Cas9系统,在APOE或LDLR双等位基因编辑效率均达60%以上,APOE和LDLR两基因双等位基因编辑效率达30%以上,提高了APOE和LDLR双基因编辑效率,降低了APOE和LDLR双等位基因敲除细胞株的构建成本,具体实际推广应用价值。