本发明公开了一种产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素基因SYBR Green I荧光定量PCR诊断试剂盒,涉及试剂盒技术领域。本发明包括40μL特异性引物、250μL荧光定量PCR反应混合液(Premix Ex Taq)、20μL ROX Reference Dye、20μL阴性对照、20μL阳性对照、500μL超纯水;根据GenBank中猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)耐热肠毒素(STⅡ)基因序列,设计1对特异性引物,进行试验,试验方法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL,重复性好,将PCR产物测序结果与GenBank中的ST基因序列比对,相似度为98.2%~100%。本发明试剂盒具有检测速度快、检出率高的特点。