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[发明专利]一种基于滚环扩增反应结合内源性酶辅助检测microRNA的荧光生物传感器分析检测方法-CN202310933567.3在审
发明人： 张瑛洧;杨宏群;王洪;李昕昊;刘子瑞 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于滚环扩增反应结合内源性酶辅助检测microRNA的荧光生物传感器分析检测方法。设计茎含有3碱基错配和7碱基粘性末端的HP发夹，加入靶标miRNA‑21结合HP发夹后在APE1酶辅助下切割HP发夹上的AP位点释放出靶标，被释放的靶标结合剩余HP发夹发生切割；制备哑铃型DP环状模板并杂交HP1引发RCA反应，实现了双重信号放大；其中DP经退火后形成哑铃形结构并在T4DNA连接酶作用下环化得到哑铃型环状模板，HP1与环化模板杂交后在Bst聚合酶驱动下发生RCA反应，得到含有G四联体重复单元的长链；在K+存在下，通过G四联体原位增强硫磺素T输出荧光信号；本发明实现了靶标高效循环和G四联体的快速生成，实现检测信号双重放大，得到不同浓度microRNA的检测结果。
一种基于扩增反应结合内源辅助检测 microrna 荧光生物传感器分析方法

[发明专利]一种采用三重扩增放大策略结合荧光和电化学检测的生物传感器-CN202310933573.9在审
发明人： 张瑛洧;张晓伟;王洪;张蓓蓓;牟婧妍 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了一种采用三重扩增放大策略结合荧光和电化学检测的生物传感器，可实现在APE1驱动下灵敏检测microRNA21。在金纳米粒子表面修饰walker链和发夹H1，在存在靶标miRNA21和APE1酶时，触发DNAwalker行走，释放荧光链，完成第一重信号放大，初步检测较高浓度的miRNA21。发夹H1切割后带有荧光团的链段脱落，固定在金球上带有巯基的剩余H1片段，可以作为新的walker链从而形成多足DNA walker1，进行第二重信号扩增。多足DNA walker2切割金电极上发夹H2的AP位点，H2的环被切割后作为触发链启动支链HCR反应，即为第三重扩增。本发明对miRNA21检测限降低为1.9pM，线性范围5pM‑10nM，同时该体系对靶标识别的特异性和驱动力的选择性优异，对不同细胞数量的真实样品也能有效区分。
一种采用三重扩增放大策略结合荧光电化学检测生物传感器

[发明专利]一种用于癌症标志物Let-7a检测的生物传感平台-CN202310933570.5在审
发明人： 张瑛洧;谢子康;王洪;张浩萍;王保争;韩鑫 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开一种用于癌症标志物Let‑7a检测的生物传感平台，首先合成了组装“核卫星”纳米结构所需的两种不同尺寸的金纳米颗粒：45nm AuNPs和16nm AuNPs。“卫星”为修饰有L链的16nm AuNPs(简称为“AP16‑L”)，“核”则是修饰有发夹H1链的45nm AuNPs(简称为“AP45‑H1”)，拉曼报告分子为5,5'‑二硫代双(2‑硝基苯甲酸)(DTNB)，其可通过静电相互作用和Au‑S链相互作用修饰到AP16上(简称为“AP16‑L‑DTNB”)。两种AuNPs通过靶标链Let‑7a触发的HCR反应，在AP45‑H1表面形成大量可连接AP16‑L‑DTNB的连续位点，最终完成多层“核卫星”纳米结构组装。多层“核卫星”结构具有更多的“SERS热点”，可以负载更多的DTNB，从而显著增强SERS信号。实验结果证实该多层“核卫星”生物传感器具有良好的靶标选择性和在实际血清样品中的检测能力。
一种用于癌症标志 let 检测生物传感平台

[发明专利]一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法-CN202210312702.8有效
发明人： 张瑛洧;王兴丛;孟金亭 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2022-03-28 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： G01N27/327 文献下载
摘要：本发明公开了一种超灵敏检测APE1的DNA walker分析检测方法，用TAE/Mg2+缓冲液将双足DNA walker与封闭链block退火形成双链DNA walker/block；用TAE/Mg2+缓冲液将DNA‑H1、DNA‑H2、DNA‑H3、DNA‑H4退火形成发夹DNA‑H1，发夹DNA‑H2，发夹DNA‑H3，发夹DNA‑H4；用三(2‑羧乙基)膦)还原巯基修饰的DNA‑H1，然后滴至金电极表面孵育10小时，再用6‑巯基‑1‑己醇处理0.5‑1h；将双链DNA walker/block、不同浓度的APE1酶与发夹DNA‑H2混合滴至金电极表面进行反应；再将发夹DNA‑H3、发夹DNA‑H4混合滴至电极表面进行反应；在室温下将亚甲基蓝滴在电极表面，避光孵育，超纯水冲洗、N2吹干，得到检测APE1酶的超灵敏电极；将上述超灵敏电极置于PBS中，进行方波伏安法信号检测，得出不同浓度的APE1酶对应的SWV信号，并绘制出标准曲线；把待测样品加入到超灵敏电极表面，37℃下孵育，设定一样的检测条件，测得不同待测样品的SWV信号，获得APE1酶的特异性检测结果。
一种灵敏检测 ape1 dna walker 分析方法

[发明专利]一种用于检测muc1粘蛋白的荧光适配体传感器及其应用方法-CN202110284379.3有效
发明人： 张瑛洧;康广杰 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2021-03-17 - 公布日： 2023-02-10 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于检测muc1粘蛋白的荧光适配体传感器，在第一组石墨烯量子点表面修饰上muc1粘蛋白的适配体DNA1，在第二组石墨烯量子点表面修饰上与muc1粘蛋白的适配体DNA1互补的探针DNA2，将两组石墨烯量子点共混，因适配体DNA1和探针DNA2的杂交作用使石墨烯量子点聚集，发生激子能量转移，导致石墨烯量子点的荧光猝灭；随后加入muc1粘蛋白，muc1粘蛋白与适配体DNA1发生特异性结合，结构发生转变，引起原本聚集的石墨烯量子点发生解聚而重新分散，体系荧光恢复；在核酸外切酶Ⅰ的作用下，形成的muc1粘蛋白/适配体复合结构中的适配体DNA1被降解，释放的muc1粘蛋白进一步与下一个muc1粘蛋白的适配体结合，参与下一个循环，从而使恢复的荧光强度进一步增强。
一种用于检测 muc1 蛋白荧光适配体传感器及其应用方法

[发明专利]一种均相熵驱动放大体系结合变色银纳米簇用于检测microRNA的比率传感器-CN202210720532.7在审
发明人： 张瑛洧;刘子瑞;徐子昊;王洪;崔方丽;谢子康 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2022-06-23 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种无酶、熵驱动结合DNA‑AgNCs检测microRNA‑21的荧光比率型生物传感器。该分析方法由两部分构成，第一部分为无酶的靶标循环设计，将L‑DNA、S、Trigger链按1:1:1的摩尔比在PB和CH3COONa的杂交缓冲液中混合并退火形成稳定的三链DNA底物，靶标存在时，触发的熵驱动循环放大体系中释放出来Trigger；第二部分为比率荧光信号探针部分，Y2‑DNA或Y3‑DNA在PB缓冲液中以DNA:AgNO3:NaBH4＝1:6:6的摩尔比混合，得到Y2‑AgNCs与Y3‑AgNCs。将Y2‑AgNCs、Y3‑AgNCs与等浓度的Y1‑DNA等体积混合，形成Y型比率荧光信号探针。当靶标microRNA‑21存在时，触发熵驱动反应导致链置换释放出Trigger链，其与Y型结构中的Y1链杂交，打开Y型结构，Y2‑AgNCs、Y3‑AgNCs链二聚体分离，实现荧光发射从红色荧光到黄色荧光的可控转变，通过两种荧光强度比值的变化，实现对靶标microRNA‑21的高灵敏度检测。
一种均相驱动放大体系结合变色纳米用于检测 microrna 比率传感器

[发明专利]一种双熵驱动放大体系结合银纳米簇用于多重靶标microRNA检测的分析方法-CN202210719430.3在审
发明人： 张瑛洧;王洪;刘子瑞;张晓伟;韩鑫;杨宏群;崔方丽 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2022-06-23 - 公布日： 2022-09-23 - 主分类号： C12Q1/682 文献下载
摘要：本发明公开了一种熵驱动放大体系结合银纳米簇用于多重靶标microRNA检测的分析方法，我们将靶标循环放大与信号产生设计在同一个体系中，基于富含鸟嘌呤(G‑rich)的AgNCs荧光增强和两个不发光的AgNCs结合形成较强荧光的纳米团簇二聚体(dimer)的两种AgNCs荧光增强现象，将其整合到熵驱动放大体系中的燃料链序列里，同时将两种熵驱动序列设计整合到一个复合结构内构建了双熵驱动复合底物，最终利用每种靶标催化其各自熵驱动的过程实现其对应AgNCs荧光信号的显著增强，从而实现对两种靶标microRNAs的单独和同时检测分析。该分析方法将多色的荧光AgNCs与熵驱动信号放大结合，能对多种microRNA实现快速、超灵敏同时检测。
一种驱动放大体系结合纳米用于多重靶标 microrna 检测分析方法

[发明专利]一种荧光分析检测APE1酶的三维DNAwalker生物传感器-CN202210386156.2在审
发明人： 张瑛洧;牟婧妍;王洪;王兴丛;张浩萍 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2022-04-13 - 公布日： 2022-08-05 - 主分类号： C12Q1/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于双金球构造三维多足DNA walker用于荧光分析APE1酶的方法。通过正丁醇法以AuNPs为基础构造了两种体系，一种将walker链按照500:1修饰到AuNPs上充当步行者，命名为AuNP‑W；另一种将Sub链按照1000:1修饰到AuNPs上充当轨道，命名为AuNP‑T。另外，内源性ATP充当DNA walker持续行走的驱动力。用TAE/Mg2+缓冲液将AuNP‑W与封闭链Block退火形成双链AuNP‑W/B；用TAE/Mg2+缓冲液将AuNP‑T与ATP适体链Apt(含FAM荧光团)退火形成双链AuNP‑S/A；将AuNP‑W/B、AuNP‑S/A与ATP按照一定比例混合得到荧光分析检测APE1酶的生物传感器，加入不同浓度的APE1酶，37℃条件下进行实时荧光定量分析，测得不同浓度的APE1酶对应的荧光曲线；把待测样品加入荧光分析检测APE1生物传感器，设定一样的检测条件，测得不同待测样品的荧光曲线，获得APE1酶的特异性检测结果。
一种荧光分析检测 ape1 三维 dnawalker 生物传感器

[发明专利]一种可循环使用的用于检测微囊藻毒素的荧光传感器及其应用方法-CN201610980678.X有效
发明人： 张瑛洧;汪松 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2016-11-08 - 公布日： 2020-04-28 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：一种可循环使用的用于检测微囊藻毒素的荧光传感器及其应用方法，属于分析化学领域。在两组石墨烯量子点表面分别修饰上与微囊藻毒素对应的核酸适配体DNA碱基互补的探针DNA1和DNA2，然后加入微囊藻毒素对应的核酸适配体DNA，通过DNA杂交使石墨烯量子点聚集，发生激子能量转移，导致石墨烯量子点荧光信号淬灭；随后加入微囊藻毒素，微囊藻毒素与核酸适配体DNA特异性结合，结构发生转变，引起石墨烯量子点聚集体解组装而重新分散，体系荧光强度恢复。本发明过程简单易行、绿色环保、成本低、灵敏度高、特异性好，循环性能优异，并成功用于实际自来水和奥林匹克公园湖水样品中微囊藻毒素的加标回收。
一种循环使用用于检测微囊藻毒素荧光传感器及其应用方法

[发明专利]一种检测蛋白质和金属离子的方法-CN201110306635.0有效
发明人：孙旭平;王磊;张瑛洧 -专利权人：中国科学院长春应用化学研究所
申请日： 2011-10-11 - 公布日： 2012-06-20 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种检测蛋白质和金属离子的方法，该方法为提供带报告荧光基团的可以与靶目标特异性结合的探针分子；将所述探针分子与富含π电子的纳米材料溶液混合，然后加入待测样品，检测荧光；其中，所述富含π电子的纳米材料选自单体为苯二胺、3，4-乙烯二氧噻吩或苯乙烯的共轭聚合物，银(I)-4，4’-联吡啶、铜(II)-4，4’-联吡啶、氯铂酸-3，3’，5，5’-四甲基联苯二胺、氯铂酸-对苯二胺或四氯合金酸-4，4’-联吡啶配位聚合物、卟啉簇集体、介孔碳和纳米C60。本发明所述检测方法成本低廉，操作简单，检测时间短、灵敏度高，应用范围广。
一种检测蛋白质金属离子方法

[发明专利]一种检测核酸的方法-CN201110306633.1有效
发明人：孙旭平;王磊;张瑛洧 -专利权人：中国科学院长春应用化学研究所
申请日： 2011-10-11 - 公布日： 2012-02-01 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种检测核酸的方法，为提供带报告荧光基团的可以与靶核酸特异性结合的探针分子；将所述探针分子与富含π电子的纳米材料溶液混合，然后加入待测样品，检测荧光；其中，所述富含π电子的纳米材料选自单体为苯二胺、3，4-乙烯二氧噻吩或苯乙烯的共轭聚合物，银(I)-4，4’-联吡啶、铜(II)-4，4’-联吡啶、氯铂酸-3，3’，5，5’-四甲基联苯二胺、氯铂酸-对苯二胺或四氯合金酸-4，4’-联吡啶配位聚合物、卟啉簇集体、介孔碳和纳米C60。本发明所述检测方法成本低廉，操作简单，检测时间短、灵敏度高，对靶核苷酸具有单碱基错配区分能力，可对多种靶核酸混合体系进行检测。
一种检测核酸方法

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