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[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜基因编辑技术及其应用-CN202211523455.2在审
发明人：柳李旺;应佳丽;王燕;徐良;马银波;王沦;姚数琦 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-11-30 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜基因编辑技术及其应用，首次在萝卜‘NAU‑067’中通过根癌农杆菌介导的遗传转化实现萝卜RsPDS基因编辑。将培养4～5d无菌苗切取带柄子叶后置于MS固体培养基上预培养3d，根癌农杆菌侵染萝卜带柄子叶后在MS固体培养基上共培养3d，之后置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基上诱导不定芽。以RsPDS基因为例，出芽后采用GUS染色初步分析是否为转基因阳性愈伤组织，采用改良CTAB法提取白化苗DNA，PCR扩增发现1株新叶全白化苗在靶位点2存在3个碱基缺失和单个碱基替换，1株白化嵌合株在靶位点1存在3个碱基插入和单个碱基替换。本发明建立起一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜功能基因编辑技术体系，为创制突变体、高效验证基因的生物学功能以及创制萝卜优异种质提供了重要技术支撑。
一种基于 crispr cas9 系统萝卜基因编辑技术及其应用

[发明专利]一种发根农杆菌介导的萝卜功能基因编辑方法及其应用-CN202211408928.4在审
发明人：柳李旺;应佳丽;王燕;徐良;王爽;谢洋;沈峰 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-11-10 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种发根农杆菌介导的萝卜功能基因编辑方法及其应用，首次在‘NAU‑LHZ’萝卜中通过发根农杆菌介导的遗传转化实现萝卜功能基因编辑。发根农杆菌侵染无根幼苗后，在MS固体培养基上共培养3d后，置于MS+300mg/L Carb的固体培养基上培养不定根。以RsGLK2.1基因为例，1株发根农杆菌诱导的不定根在靶位点2中成功被编辑，将成功编辑的不定根置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基中诱导愈伤组织，通过愈伤组织表型分析进一步证实其成功编辑。本发明可快速验证萝卜关键候选基因的生物学功能，极大地加快萝卜优异种质创新与新品种选育进程。
一种发根杆菌萝卜功能基因编辑方法及其应用

[发明专利]一种快速获得萝卜转基因材料的方法-CN202210536365.0有效
发明人：王燕;王爽;易小芳;应佳丽;董俊辉;柳李旺;徐良 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-05-20 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速获得萝卜转基因材料的方法，包括：对萝卜种子进行消毒种植无菌苗；活化携带目的基因的发根农杆菌；制备侵染液；获取无根苗外植体并浸入菌液进行侵染；经过共培养和脱菌培养30d后，通过表型筛选、PCR检测和qRT‑PCR分析鉴定阳性毛状根；切取阳性毛状根放置于愈伤组织培养基上诱导愈伤组织，获得转基因愈伤组织。本发明提高了发根农杆菌诱导萝卜毛状根的效率，缩短了发根时间，成功诱导了转基因愈伤组织，能够进行萝卜部分本体基因功能验证。
一种快速获得萝卜转基因材料方法

[发明专利]萝卜膜联蛋白RsANN1a及其编码基因和应用-CN202110730694.4在审
发明人：柳李旺;沈峰;徐良;王燕;应佳丽;何晴 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2021-06-29 - 公布日： 2021-09-28 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明公开了一种萝卜膜联蛋白RsANN1a及其编码基因和应用，包括：(1)萝卜膜联蛋白RsANN1a核苷酸与氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；(2)以萝卜cDNA为模板对RsANN1a进行克隆；(3)RsANN1a基因在高温胁迫下表达特性分析，结果显示RsANN1a基因能够响应高温胁迫，并且在高温处理下其表达量显著上升；(4)本发明还对RsANN1a基因的功能进行鉴定，在野生型拟南芥中过表达RsANN1a能够显著提高其耐热能力。本发明为今后利用基因工程技术培育耐高温萝卜提供了理论依据，具有很高的应用价值。
萝卜蛋白 rsann1a 及其编码基因应用

[发明专利]一种生产类胡萝卜素的方法-CN201810780339.6有效
发明人：李玉刚;钟银珊;应建航;应佳丽 -专利权人：杭州园泰生物科技有限公司
申请日： 2018-07-17 - 公布日： 2021-01-22 - 主分类号： C12P39/00 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种生产类胡萝卜素的方法，其包括如下步骤：将复合微生物培养物离心，弃上清，收集菌体，然后添加丙酮，进行超声破壁，再静置30min，然后离心，收集上清液和沉淀，往沉淀中添加相同体积的丙酮，采用超声处理，收集上清液；合并两次上清液，然后用旋转蒸发器低温蒸干，残留物用乙醚溶解，然后加入KOH甲醇溶液，静置10‑30min，再添加NaCl溶液使溶剂分层，收集上层乙醚相，将乙醚相蒸干，即得类胡萝卜素产品。本发明制备获得的类胡萝卜素产品纯度较高，达到94%以上，折算成收率达到90%以上。
一种生产类胡萝卜素方法

[发明专利]一种制备和纯化虾青素的方法-CN201810814956.3有效
发明人：李玉刚;钟银珊;应建航;应佳丽 -专利权人：杭州园泰生物科技有限公司
申请日： 2018-07-24 - 公布日： 2020-11-17 - 主分类号： C12P39/00 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种制备和纯化虾青素的方法，其包括如下步骤：步骤1）淀粉废水预处理，步骤2）制备混合菌液，步骤3）菌藻混合培养，步骤4）提取虾青素，步骤5）纯化虾青素。本发明方法通过从雨生红球藻中制备和纯化虾青素，提高了虾青素的纯度,收率达到90%以上。
一种制备纯化虾青素方法

[发明专利]一种利用淀粉废水生产虾青素的方法-CN201810749121.4有效
发明人：李玉刚;钟银珊;应建航;应佳丽 -专利权人：杭州园泰生物科技有限公司
申请日： 2018-07-10 - 公布日： 2020-11-17 - 主分类号： C12P39/00 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种利用淀粉废水生产虾青素的方法，其包括如下步骤：步骤1）淀粉废水预处理，步骤2）制备混合菌液，步骤3）菌藻混合培养，步骤4）提取虾青素。本发明方法既处理了淀粉废水，又制备了虾青素，一举两得，应用前景广阔。
一种利用淀粉废水生产虾青素方法

[发明专利]一种复合微生物培养物及其在生产类胡萝卜素中的应用-CN201810714329.2有效
发明人：李玉刚;钟银珊;应建航;应佳丽 -专利权人：杭州园泰生物科技有限公司
申请日： 2018-07-03 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于微生物技术领域，公开了一种用于制备类胡萝卜素的复合微生物培养物，其包括枯草芽孢杆菌、荚膜红假单胞菌以及粘红酵母菌。本发明复合微生物培养物提高了类胡萝卜素的产量，并且降低了培养成本。
一种复合微生物培养及其生产类胡萝卜素中的应用

[实用新型]一种检测用试管架-CN201921673971.7有效
发明人：董林华;邱少琛;应佳丽;李燕 -专利权人：浙江优科检测技术有限公司
申请日： 2019-10-09 - 公布日： 2020-06-30 - 主分类号： B01L9/06 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种检测用试管架，所述上支座底部的靠中间位置固定连接有支撑杆，所述支撑杆的底部固定连接有下支座，所述下支座的内部开设有空腔，所述下支座内腔底部的靠后端位置固定连接有固定板，所述固定板的顶部与下支座内腔的顶部固定连接，所述固定板的后表面固定连接有支杆，所述支杆的顶部和底部均开设有第一滑槽，所述支杆的靠前端位置套设有滑架。该检测用试管架，通过连杆、连接板、第二滑槽、滑块、滑架、套杆、滑套、抵板以及手拧螺栓的配合使用，使得本装置具有良好的锁紧功能，从而让使用者在使用本装置时可以与桌面进行锁紧，避免了本装置出现被碰倒的情况，提高了本装置的实用性。
一种检测试管架

[发明专利]萝卜耐盐基因RsNHX1及应用-CN202010046089.0在审
发明人：王燕;应佳丽;柳李旺;张旸;徐良 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-01-16 - 公布日： 2020-05-01 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明属于植物生物技术与分子育种领域，涉及萝卜盐胁迫响应过程中显著变化基因RsNHX1，具体涉及萝卜耐盐基因RsNHX1及应用，萝卜耐盐基因RsNHX1的核苷酸序列如SEQ ID N O.1所示，含有所述的耐盐基因RsNHX1的转运蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明填补萝卜耐盐基因RsNHX1的空白，提供萝卜耐盐基因RsNHX1的cDNA序列，采用RT‑qPCR技术分析盐胁迫下不同时间RsNHX1基因的表达特性，进一步设计克隆引物构建pCAMBIA2301‑RsNHX1过表达载体和抑制表达载体，转化拟南芥后kan+筛选，以及盐处理表型鉴定。
萝卜基因 rsnhx1 应用

[发明专利]一种提高乌龟免疫力的沉性膨化饲料-CN201510688848.2在审
发明人：杨梅玲;李立军;王云龙;夏爽;应佳丽 -专利权人：湖州海皇生物科技有限公司
申请日： 2015-10-21 - 公布日： 2016-09-14 - 主分类号： A23K50/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高乌龟免疫力的沉性膨化饲料，按重量百分比计，由以下组分混合制成：国产鱼粉18‑22％，面粉13‑18％，豆粕32‑37％，肉骨粉5‑8％，全蛋粉3‑5％，蝇蛆粉5‑10％，大豆油1‑3％，免疫调节组合物2‑3.5％，维生素预混料1‑2％，矿物质预混料1‑2％，磷酸二氢钙1‑2％，氯化胆碱0.1‑0.3％。本发明饲料成分安全性高，无毒副作用；能够提高乌龟的抗病能力和免疫力，提高乌龟的成活率，保证乌龟快速生长。
一种提高乌龟免疫力膨化饲料

[实用新型]一种可伸缩型饲料取样器-CN201420325065.9有效
发明人：杨梅玲;蔺佳良;应佳丽;蒋鲁萍;孙金金 -专利权人：湖州海皇生物科技有限公司
申请日： 2014-06-18 - 公布日： 2014-10-15 - 主分类号： G01N1/10 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种可伸缩型饲料取样器。本实用新型的可伸缩型饲料取样器包括：第一伸缩杆，在其顶部设置有收集槽，并在其底部设置有两个伸缩圆孔，其中，所述收集槽为在第一伸缩杆顶部切开的斜面，该斜面的倾斜角度为30°至45°，且其长度为10厘米；第二伸缩杆，在其顶部设置有两个可伸缩圆柱体，并在其底部设置有两个伸缩圆孔；第三伸缩杆，在其顶部设置有两个可伸缩圆柱体，并在其底部设置有弧形夹，其中，第一伸缩杆通过设置在第一伸缩杆底部的伸缩圆孔和设置在第二伸缩杆顶部的可伸缩圆柱体与第二伸缩杆连接，并且第二伸缩杆通过设置在第二伸缩杆底部的伸缩圆孔和设置在第三伸缩杆顶部的可伸缩圆柱体与第三伸缩杆连接。
一种伸缩饲料取样

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